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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞、組織樣本中提取總蛋白。提取過程簡單方便。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

植物

產(chǎn)品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液準備：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白穩(wěn)定劑和2ul蛋白酶抑制劑和10ul葉綠素去除劑，混勻后置冰上備用。
2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg鮮嫩植物組織樣本用刀盡可能剪碎，加入500ul提取液A后用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿液吸入一個預(yù)冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，加入5ul葉綠素去除劑，充分混勻，在4℃振蕩10分鐘。
6. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
7. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到植物總蛋白。
8. 上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的核蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。
4.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

參考文獻

1.Na Zhao, Xinyue Xu, Yashitola Wamboldt, Sally A. Mackenzie, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）

2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）

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