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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 白細(xì)胞蛋白提取試劑盒適用于白細(xì)胞中提取總蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物白細(xì)胞

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
1.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.新鮮全血樣品按下列步驟操作，已提取的白細(xì)胞樣品從步驟6開(kāi)始操作。
5.離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機(jī)沒(méi)有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：

使用方法

1. 提取液制備：
按需要提取的樣品數(shù)量，每400μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取1.5ml新鮮抗凝血，靜置吸去上層血漿。
3. 加入白細(xì)胞提取液1ml，輕輕吹打混勻，冰上靜置5分鐘。過(guò)程中適當(dāng)偶爾搖動(dòng)。
4. 在4℃，400-500×g離心5分鐘，收集底部白細(xì)胞沉淀。
5. 重復(fù)步驟3和4一次。
6. 在白細(xì)胞中加入100-400μl冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
7. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
8. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到白細(xì)胞蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.蛋白濃度低？
處理樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑B的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。直至沉淀數(shù)量明顯減少。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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