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          血細(xì)胞蛋白提取試劑盒
          • 血細(xì)胞蛋白提取試劑盒
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          更新時(shí)間:2024-08-20 21:00:06

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          產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 血細(xì)胞蛋白提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物全血細(xì)胞中提取總蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時(shí)內(nèi)完成。 本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份,包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。 本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項(xiàng)
          1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
          2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          3.試劑拆封后請盡快使用完!
          有效期
          一年
          檢測方法
          WB,IP等
          適用樣本
          動(dòng)物血細(xì)胞
          產(chǎn)品特點(diǎn)
          1.使用方便,將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
          2.含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
          3.紫外檢測蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB,IP等
          儀器準(zhǔn)備
          1.離心機(jī)
          2.振蕩器
          3.渦旋混勻器
          4.移液器
          5.冰箱
          6.冰盒
          試劑準(zhǔn)備
          1.PBS緩沖液
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準(zhǔn)備
          1.離心管
          2.吸頭
          3.一次性手套
          使用注意事項(xiàng)
          使用注意事項(xiàng):
          ? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
          ? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
          ? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
          ? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
          ? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
          ? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
          ? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時(shí)間。
          使用方法
          1. 提取液準(zhǔn)備:
          每500ul冷的血細(xì)胞蛋白提取液中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物,充分混勻后置冰上備用。
          2. 取500ul新鮮抗凝血,3000×g離心10分鐘。
          3. 移除上層血漿,收集下層血液細(xì)胞沉淀。
          4. 用PBS洗滌血細(xì)胞沉淀2次。
          5. 加入500ul-1ml冷的蛋白提取液,吹打混勻后,在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
          6. 在4℃,12000-14000×g條件下離心10分鐘。
          7. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即可得到血細(xì)胞總蛋白。

          常見問題分析
          1.蛋白濃度低?
          處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
          2.用什么方法定量蛋白?
          建議用Lowry法。不適合用Bradford法,因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。
          3.提取的蛋白具有活性嗎?
          本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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