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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 全血總蛋白提取試劑盒提供適用于從各種動(dòng)物抗凝/非抗凝全血樣品中提取總蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用不兼容。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物全血

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 本試劑盒提取的是全血總蛋白，含所有高豐度的白蛋白等。電泳前可以蛋白稀釋液稀釋至約5 μg/μl。
? 電泳加loading buffer后水煮時(shí)，蛋白液有時(shí)會(huì)變得非常粘稠，可以用65℃保溫10分鐘代替沸水煮。
? 對(duì)于某些目的蛋白在血清中含量很低的情況，或者目的蛋白與白蛋白分子量相近的情況，可能需要先去除白蛋白。需要根據(jù)情況選擇。白蛋白等去除試劑盒需要自備。

使用方法

1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取300 μl全血樣本，加入300 μl蛋白提取液，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-40分鐘。
3. 在4℃，14000×g條件下離心10分鐘。
4. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到全血蛋白。
5. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

2.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

3. 電泳蛋白煮樣品后成膠狀？
全血蛋白樣品濃度，需要稀釋到合適的濃度再進(jìn)行下游檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

1.Jidong Liu et al.
Genome sequencing analysis of a family with a child displaying severe abdominal distention and recurrent hypoglycemia
Molecular Genetics & Genomic Medicine 2020

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