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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 血小板蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物血小板

產(chǎn)品特點

1.使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

產(chǎn)品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.Tyrode's solution/CGS緩沖液/生理鹽水/ PBS等
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 以下血小板收集方法僅供參考。有條件時可以使用全自動血小板分離機分離血小板，可以使用凝膠過濾法收集，降低活化程度。也可使用實驗室常用的方法或者根據(jù)文獻選擇方法。
? 血小板蛋白回收率大約70-80%。

使用方法

1. 取1-5 ml ACD抗凝血，室溫200×g離心10分鐘。
2. 收集上層血漿，棄下層血液細胞沉淀層。
3. 將上層血漿層室溫200×g離心5分鐘。
4. 上層血漿室溫3000×g離心10分鐘。
5. 棄上清，沉淀中加入500 μl 血小板洗滌液B洗滌一次，3000×g離心10分鐘。
6. 棄上清，沉淀中加入200-500 μl冷的蛋白提取液A和2 μl蛋白酶抑制劑混合物，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20分鐘。
7. 在4℃，12000-16000×g條件下離心15分鐘。
8. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到血小板蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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