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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 厚壁微生物總蛋白提取試劑盒可以從各種厚壁微生物菌體中提取總蛋白。包括各種難以裂解的酵母、絲狀真菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、芽孢、微藻、蟲(chóng)卵等有較厚的細(xì)胞壁的樣品。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，不需要機(jī)械研磨或有機(jī)溶劑。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。該試劑盒提取的蛋白可用于SDS-PAGE電泳檢測(cè)、Western blotting、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)等下游實(shí)驗(yàn)。每毫升菌液大概可以提得5-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法進(jìn)行蛋白定量。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

厚壁微生物

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便：不需昂貴設(shè)備。
2.可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3.將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4.采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過(guò)程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

使用方法

1. 提取液的準(zhǔn)備：
根據(jù)所需要提取的樣本量，每500 μl提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和5 μl蛋白穩(wěn)定劑，充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃， 10000×g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。
4. 按每100 mg-150 mg濕重菌體樣本加入500 μl提取液，吹打混勻，2-8℃振蕩30-45分鐘。
5. 在150 w-300 w，10 s超聲/10 s間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。
6. 在4℃， 12000×g條件下將提取液離心5分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。
7. 即得到總蛋白樣品。
8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時(shí)可能沒(méi)有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒(méi)有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。部分革蘭氏陽(yáng)性菌可能較難裂解，進(jìn)行超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒(méi)有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

參考文獻(xiàn)

1.HaiFeng Su, et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）

2.HF Su, et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）

3.H Shi, et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）

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