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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物高爾基體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解高爾基體組份，本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、蛋白活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

植物

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。
? 使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高爾基體回收率會(huì)下降。

?

使用方法

1. 提取液準(zhǔn)備：
每500ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取200-500mg新鮮植物葉片組織樣本，用PBS洗滌干凈。
3. 用刀盡可能剪碎。
4. 加入1ml冷的試劑 A，置冰上10分鐘。
5. 用Dounce勻漿器充分勻漿30-40次。
6. 將勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7. 將上清在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 將上清在4℃，6000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
9. 將上清在4℃，50000×g力條件下離心20分鐘。
10. 棄上清，在沉淀中加入500μl冷的試劑B，混勻。
11. 在4℃，50000×g力條件下離心30分鐘。棄上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300ul冷的蛋白提取液C，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
13. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
14. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到高爾基體蛋白。
15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑C的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〤中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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