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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 骨組織總蛋白提取試劑盒（2D電泳用）適用于從各種骨組織樣本中提取總蛋白?？梢蕴崛「鞣N密質(zhì)骨與松質(zhì)骨、軟骨組織樣品。可以用于新鮮骨組織樣本或脫鈣骨組織樣本。提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

骨組織

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

?

使用方法

1. 提取液制備：
根據(jù)樣本數(shù)量，按每400 μl冷的骨組織蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑，混勻后置室溫備用。
2. 取新鮮骨組織樣品，在4℃，用pH7.4的PBS緩沖液或生理鹽水中充分浸泡。換新鮮生理鹽水/PBS再次充分浸泡，然后用純水清洗，去除血液，紅細(xì)胞。
3. 將骨碎，稱重后放入裝有液氮的研缽中，將骨組織磨成粉末，保持液氮不能揮發(fā)。
4. 將骨組織粉末加入離心管中，按每200 mg骨組織加入400 μl蛋白提取液。
5. 混勻后在室溫條件下振蕩30分鐘。
6. 在80-100 w，5 s超聲/5 s間隔條件下冰浴超聲20次。
7. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
8. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到骨組織總蛋白。
9. 上述蛋白提取物直接用于下游實(shí)驗(yàn)或分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>

常見問題分析

1.提取速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白回收率，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時(shí)間即可。

2.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

參考文獻(xiàn)

1.Liu L. Wang R. Zhu H, et al.
Rehmanniae Radix Preparata suppresses bone loss and increases bone strength through interfering with canonical Wnt/β-catenin signaling pathway in OVX rats
Osteoporosis International 2019

2.Qudong Yin Jian Wang Qiang Fu et al.
CircRUNX2 through has‐miR‐203 regulates RUNX2 to prevent osteoporosis
Journal of Cellular and Molecular Medicine 2018
3.Ma R. Wang L. Zhao B., et al.
Diabetes Perturbs Bone Microarchitecture and Bone Strength through Regulation of Sema3A/IGF-1/β-Catenin in Rats
Cellular Physiology and Biochemistry 2017

4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Bone 2014

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