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產(chǎn)品概述 product description 貝博TM BBproExtraTM植物膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。植物膜蛋白提取試劑盒可以從各種植物中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡(jiǎn)單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白用于雙向電泳。如需要用于SDS-PAGE電泳檢測(cè)、Western blotting、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、報(bào)告基因檢測(cè)、酶活分析等下游實(shí)驗(yàn)的試劑盒，請(qǐng)聯(lián)系貝博，選用其它產(chǎn)品號(hào)的產(chǎn)品（BB-3152）。

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

雙向電泳

適用樣本

植物

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、使用方便。
2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

雙向電泳

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1、試劑準(zhǔn)備：
每500ul膜提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200mg植物組織樣本用刀盡可能剪碎。
3、加入500ul冷的提取液A，用組織勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。
4、勻漿后移入一個(gè)干凈離心管中在2-8℃振蕩1-2小時(shí)。
5、將提取液在2-8℃條件下12000g離心5分鐘，取上清。
6、在上清中加入5ul提取液B，充分混勻。
7、在37℃水浴10分鐘。
8、在37℃， 1000g離心3分鐘。
9、此時(shí)液體分為2層，小心移除上層部分，吸取下層管底部大約50ul液體。
10、用50-150μl冷的膜蛋白溶解液C溶解下層溶液，即得膜蛋白樣品。
11、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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