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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 酵母蛋白提取試劑盒適用于從各種酵母樣本中高效而溫和地抽提可溶性總蛋白。提取過程簡單方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細胞的破壞，避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白直接用于等點聚焦電泳、雙向電泳。如需要用于SDS-PAGE電泳檢測、Western blotting、凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、報告基因檢測、酶活分析等下游實驗的試劑盒，請聯(lián)系貝博，選用其它產(chǎn)品號的產(chǎn)品（相關(guān)產(chǎn)品：BB-3125）。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

雙向電泳

適用樣本

酵母

產(chǎn)品特點

1、使用方便。
2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

雙向電泳

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用冷PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每100-200ul體積酵母沉淀物中加入300-500ul冷的酵母蛋白提取液A，充分混勻。
5. 在室溫或37℃條件下于振蕩30分鐘-2小時。
6. 在4℃，2000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，留沉淀。
7. 在沉淀物中加入300-500ul冷的酵母蛋白提取液B，混勻后，在2-8℃條件下振蕩30-45分鐘。
8. 在4℃，14000×g條件下離心15分鐘。
9. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到酵母總蛋白。
10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A和B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

參考文獻

1.Qi Yan et al.
Efficient substrate screening and inhibitor testing of human CYP4Z1 using permeabilized recombinant fission yeast
Biochemical Pharmacology 2017

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