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產(chǎn)品概述 product description 貝博TM BBproExtra® 膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。膜蛋白提取試劑盒可以從細(xì)胞組織樣本中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。提取的蛋白樣品中不含鹽，可以直接用于等電聚焦、雙向電泳等。如下游實驗不需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，可選用貝博用于Western Blotting、普通蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗的其他試劑盒（相關(guān)產(chǎn)品BB-3103）。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

雙向電泳

適用樣本

動物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品特點

1、使用方便。
2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

雙向電泳

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個以上細(xì)胞，在4℃，500g條件下離心3-5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
或者取50mg-100mg組織樣本，用冷PBS洗干凈，然后用刀盡可能剪碎，加400ul冷的試劑 A，用組織勻漿機(jī)/器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 洗滌后的細(xì)胞樣品中加入400ul冷的試劑 A，充分混勻。
4. 在2-8℃條件下振蕩20-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解，細(xì)胞沉淀明顯減少。
5. 在2-8℃低溫下12000g離心5分鐘，取上清。
6. 在37℃水浴10分鐘。
7. 在37℃， 1000g離心3分鐘。
8. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50ul液體。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解該下層液體，即得膜蛋白樣品。
10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

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