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          RIPA裂解液(不含triton x-100)
          • RIPA裂解液(不含triton x-100)
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          更新時間:2024-08-20 21:00:06

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          產(chǎn)品概述 product description 貝博RIPA裂解液采用優(yōu)質(zhì)原料配制,對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,是經(jīng)典常用的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等下游實驗。 本RIPA裂解液成分為25mM Tris?HCl pH 7.6, 150mM NaCl, 1% NP-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS。根據(jù)相應(yīng)實驗要求添加自己需要的蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
          保存溫度
          2-8℃
          注意事項
          1.試劑拆封后請盡快使用完!

          有效期
          1年
          檢測方法
          WB、IP等
          適用樣本
          細胞、組織
          產(chǎn)品應(yīng)用
          WB、IP等
          儀器準備
          1.離心機
          2.振蕩器
          3.渦旋混勻器
          4.移液器
          5.冰箱
          6.冰盒 7.勻漿機/勻漿器
          試劑準備
          1.PBS緩沖液 (pH7.4,實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
          2.蛋白定量試劑盒
          耗材準備
          ? 離心管
          ? 吸頭
          ? 一次性手套
          使用注意事項
          1.實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
          2.整個過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
          3.本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
          4.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
          5.禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
          6.使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并清除殘留清潔劑。
          7.避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

          使用方法
          A. 細胞裂解
          1. 取5-10×106個細胞,在4℃,1000rpm條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細胞。
          2. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
          3. 每5×106個細胞中加入500ul冷的裂解液(每106個細胞,大約10mg或10ul壓積,加100ul RIPA裂解液。大約相當于6孔板的每孔加入100ul~150ul,或一個75 cm2培養(yǎng)瓶加1 ml。裂解液和細胞應(yīng)充分接觸。如果RIPA裂解液不足量,細胞裂解效率將會降低),混勻后,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
          4. 在4℃,14000rpm條件下離心15分鐘。
          5. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,用于下游實驗。

          B. 組織裂解
          1. 取100mg組織樣本剪碎,加入1ml裂解液,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
          2. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中,在4℃,10000rpm條件下離心5分鐘。
          3. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,用于下游實驗。

          上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>

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