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2-8℃ 避光

1.長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。 2.試劑A和試劑C為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

一年

流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦/熒光酶標儀/熒光光度計

細胞

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1.流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦/熒光酶標儀/熒光光度計 2.離心機 3.移液器 4.冰箱 5.冰盒

1.PBS緩沖液 2.HBSS

1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。 2.BBcellProbe® M61探針和陽性誘導劑為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。融解后離心至管底部再打開螺旋蓋。 3.BBcellProbe® M61探針為了便于觀察防止誤操作導致?lián)p失，在試劑盒中時是采用透明管包裝，收到后可以離心移入干燥黑色避光密封管或者用鋁箔包裹避光。 4.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。 5.染色后立即進行分析。 6.標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先確定條件。以下方法僅供參考。 7.BBcellProbe® M61探針容易受潮，受潮后穩(wěn)定性較差，注意干燥保存。 8.吸取BBcellProbe® M61探針母液時要用干燥的新吸頭，不能使用含水的吸頭。 9.未使用完的BBcellProbe® M61探針母液請擰緊螺旋蓋，避免受潮失效。 10.BBcellProbe® M61探針工作液含水，配制后不可以長期保存，須現(xiàn)配現(xiàn)用。 11.陽性誘導劑配制工作液后可以保存。 12.M61探針和陽性誘導劑融解后離心至管底部再打開螺旋蓋，防止開蓋時損失。

試劑配制： 1.BBcellProbe® M61染色工作液（I）配制： 根據樣品數量用試劑D稀釋液稀釋 BBcellProbe® M61探針5倍，配制成BBcellProbe® M61染色工作液（I）染色液，充分混勻。 2.陽性誘導劑工作液（II）配制： 根據樣品數量用試劑D稀釋液10倍稀釋 陽性誘導劑（10X），配制成1X 陽性誘導劑工作液（II），充分混勻。 細胞染色 1.用HBSS將樣品細胞制備成單細胞懸液，使其密度為1×106細胞/ml以上。 2.按照500ul每管制備細胞懸液，并記錄編號。 后續(xù)染色順序： 1號管僅含BBcellProbe® M61探針（陰性對照，選做）； 2號管含BBcellProbe® M61探針和熒光淬滅劑（待測樣品細胞）； 3號管含BBcellProbe® M61探針，熒光淬滅劑和陽性誘導劑（陽性性對照，選做）； 另外需要準備一管不加以上試劑的細胞樣品（4號管）用于流式儀器設置。 3.向上述每個樣品的細胞中分別加入5µl BBcellProbe® M61染色工作液（I）并充分混勻。 4.將所有1號2號3號樣品管在37℃避光孵育15分鐘。 5.向2號、3號管中加入5ul熒光淬滅劑，并混勻。 6.向3號管中加入5µl-10ul 陽性誘導劑工作液（II），并充分混勻。 7.將所有1號2號3號樣品管在37℃避光孵育15分鐘。 8.離心力1000×g以下離心5分鐘收集細胞。 9.用500µl HBSS重懸細胞。 10.染色后，將樣品置于冰上，1小時內進行流式分析。 細胞檢測 用不含試劑的細胞樣品（4號管）進行流式儀器設置。 用流式488nm激發(fā)器進行熒光分析，BBcellProbe® M61探針激發(fā)波長495nm，發(fā)射波長515nm。 1號管-僅含BBcellProbe® M61探針：線粒體和胞漿有熒光，熒光信號較強； 2號管-含BBcellProbe® M61探針和淬滅劑：僅線粒體呈現(xiàn)熒光，熒光強度居中； 3號管-含BBcellProbe® M61探針，熒光淬滅劑和陽性誘導劑：陽性對照細胞。線粒體和胞漿熒光均被淬滅，熒光信號最弱。 2號管熒光信號強度的變化說明線粒體通透性轉換孔被激活的情況。

1.Weiqi Wu et al. Kaempferol protects mitochondria and alleviates damages against endotheliotoxicity induced by doxorubicin Biomedicine & Pharmacotherapy 2020 （IF=3.743） 2.Qing Zhou et al. Tetramethylpyrazine alleviates iron overload damage in vascular endothelium via upregulating DDAHII expression Toxicology in Vitro 2020 （IF=3.067） 3.Xiaomin Zhao et al. Circular RNA CircEZH2 Suppresses Transmissible Gastroenteritis Coronavirus-induced Opening of Mitochondrial Permeability Transition Pore via Targeting MiR-22 in IPEC-J2 International Journal of Biological Sciences 2019 （IF=4.067） 4.Siqi Zhou et al. Magnolol induces apoptosis in osteosarcoma cells via G0/G1 phase arrest and p53‐mediated mitochondrial pathway Journal of Cellular Biochemistry 2019 （IF=3.448） 5.Jing Ye et al. Diosbulbin B-Induced Mitochondria-Dependent Apoptosis in L-02 Hepatocytes is Regulated by Reactive Oxygen Species-Mediated Autophagy Frontiers in Pharmacology 2019 （IF=3.845）