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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 皮膚組織蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種動物皮膚組織樣品中提取蛋白。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為不具有天然蛋白構(gòu)象的非活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。本試劑盒提取的蛋白樣本含

保存溫度

2-8℃ 保存

注意事項(xiàng)

蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

有效期

一年

檢測方法

WB等

適用樣本

皮膚組織

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。 3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。 4.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。 5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī) 2.振蕩器 3.勻漿機(jī)/勻漿器 4.渦旋混勻器 5.移液器 6.冰箱 7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

PBS緩沖液蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管 2.吸頭 3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。 2.蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。 3.實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。 4.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。 5.如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。 6.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法

1.提取液準(zhǔn)備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物B和2ul蛋白酶抑制劑混合物C，混勻后置冰上備用。 2.取100-200mg皮膚組織樣本，用PBS洗干凈，然后用刀盡可能剪碎，加入500ul蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無明顯肉眼可見固體。 3.將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩30-40分鐘。 4.在4℃，10000-14000×g條件下離心15分鐘。 5.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到皮膚組織蛋白。 6.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。皮膚組織蛋白質(zhì)含量較低，適當(dāng)加大組織上樣量。 2.用什么方法定量蛋白？建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

參考文獻(xiàn)

1.Guoying Miao, Li Sun, Baoguo Liu, et al. MMP9 and RECK expression in cutaneous lichen planus Int J Clin Exp Pathol 2016

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