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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2；Vero-HCV-E2培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣細(xì)胞
品牌 貼壁生長
特征特性 Vero-HCV-E2細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的E2基因，能穩(wěn)定表達(dá)E2蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1：
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C40
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E2；Vero-HCV-E2培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-FOXO4/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-NKG2D/CD314 /FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞受體/自然殺傷細(xì)胞活化性受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh BTBD17 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 規(guī)格 0.2ml
ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原 0.5mg
HE4 英文名稱： 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh RIT1 RIT1蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-NKG2D/CD314 /FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞受體/自然殺傷細(xì)胞活化性受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit 小鼠抑制素AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/APC APC標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
PV ELISA Kit 魚卵黃高磷蛋白 96T
MeCP2 英文名稱： 甲基化CpG結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml
ARHGAP20 英文名稱： Rho GTP酶激活蛋白20抗體 0.2ml
Anti-CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-human k-chain 兔抗人k-鏈 1mg
Laminin 2 alpha 英文名稱： 層粘蛋白α2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh DOK3 對接蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml
AECA(Mouse anti-endothelial cell antibody) ELISA Kit 小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 英文名稱： 磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體 0.1ml
Anti-Phospho-c-Fos (Ser32) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化c-fos抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
MT ELISA Kit 大鼠金屬硫蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-MAP1A 微管相關(guān)蛋白1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格 0.1ml
EK(Human epidermal keratin) ELISA Kit 人表皮角蛋白 96T
Nestin 英文名稱： 巢蛋白/神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白抗體 0.1ml
BRCA1 英文名稱： 癌易感基因1抗體 0.1ml
Anti-MAP1A 微管相關(guān)蛋白1A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
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