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詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱 白牦牛皮膚細(xì)胞；Yak-2培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞系來源于一雄性白牦牛的耳組織。2004年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H：
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1：
2傳代；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
白牦牛皮膚細(xì)胞；Yak-2培養(yǎng)操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
貼壁細(xì)胞: 對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
Anti-Endostatin/FITC 熒光素標(biāo)記內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-MMP-15/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh C22orf25 22號染色體開放閱讀框25抗體 規(guī)格 0.2ml
CBFA1/RUNX2 (Runt-related Transcription Factor 2) 成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子(多肽) 0.5mg
HCLS1 英文名稱： 造血干細(xì)胞特異性蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh SA2 粘結(jié)蛋白SA2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MMP-15/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1) 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-CBL2(Tyr774) 磷酸化原癌蛋白CBL2抗體 規(guī)格 0.1ml
單組分AEC染色試劑盒 200片/20ml 需用甘油封固,紅色
VAPB 英文名稱： 囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白B 0.2ml
DNA polymerase mu 英文名稱： DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗體 0.2ml
Anti-phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-Mink IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗水貂IgG 0.1ml
G6PC3 英文名稱： 葡萄糖-6-磷酸酶3/G6Pase-β抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ARHGAP24 Rho GTP酶激活蛋白24抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-IKB Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記KB抑制蛋白α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格 0.1ml
Anti-PLK1/STPK13/FITC 熒光素標(biāo)記絲/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
MHC(Human myosin heavy chain) ELISA Kit 人肌球蛋白重鏈Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-p63 (Ser160/Ser162) 磷酸化P63抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh HSD17B1/HSD17 羥類固醇脫氫酶17β抗體 規(guī)格 0.1ml
EBMZ(Human epidermal basement membrane zone) ELISA Kit 人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體 96T
PRRSV M protein 英文名稱： 豬藍(lán)耳病病毒M蛋白抗體 1ml
CLN5 英文名稱： 神經(jīng)細(xì)胞蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN5抗體 0.2ml
Anti-Phospho-p63 (Ser160/Ser162) 磷酸化P63抑制基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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