細胞名稱 豬腎細胞;PK(15)培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞逆轉(zhuǎn)錄病毒陽性,對豬霍亂,豬皰疹,口蹄疫,牛痘等敏感。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS:
Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:2-1:4,每周換液2-3次
傳代情況 P134/136
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
豬腎細胞;PK(15)培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Phospho-FoxO1 (Ser319) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠叉頭蛋白家族1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-NKA/FITC 熒光素標記神經(jīng)激肽A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh BTG1 B細胞遷移基因1抗體 規(guī)格 0.2ml
AT1R/AGTR1(Angiotensin II Type 1 Receptor) 血管緊張素Ⅱ-1型受體抗原 0.5mg
HBV pre S1 protein 英文名稱: 人pre S1/S2蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) 磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-NKA/FITC 熒光素標記神經(jīng)激肽A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Klf4 (Kruppel likefactor 4) 腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Caspase-9 (Ser196) 磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體 規(guī)格 0.1ml
BSA封閉液 10ml Gibco原料,2%血清
VP2 英文名稱: 重組豬細小病毒VP2蛋白抗體 0.2ml
DNA Polymerase delta, catalytic subunit 英文名稱: DNA聚合酶δ催化亞單位/DNA pol δ cat抗體 0.2ml
Anti-alpha-L-arabinofuranosidase 果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
Rabbit Anti-MK IgM/APC APC標記的兔抗猴IgM 0.1ml
GDIA1 英文名稱: 轉(zhuǎn)移抑制基因GDIA1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANKRD13A 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Phospho-IRAK1 (Ser376) /FITC 熒光素標記磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml
Anti-SATB1/FITC 熒光素標記核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-CYP3A4/FITC 熒光素標記抗細胞色素P450 3A4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 熒光素標記整合素α4β7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CAS/CSE1 細胞凋亡敏感性基因抗體 規(guī)格 0.1ml
E2 tag E2 tag多肽抗原 0.5mg
HENMT1 英文名稱: HEN1甲基轉(zhuǎn)移酶同源蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SIAH1 泛素連接酶Siah1抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 熒光素標記整合素α4β7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。