幼兔肺成纖維樣細(xì)胞培養(yǎng)只能用于科研，不得用于臨床。應(yīng)用公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全：大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株。細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿，光澤度好，*，專業(yè)技術(shù)指導(dǎo)。歡迎廣大科研用戶！

細(xì)胞名稱  幼兔肺成纖維樣細(xì)胞培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維樣細(xì)胞

品牌 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞系來源于一出生三天的幼兔的正常肺組織。2014年由中科院昆明細(xì)胞庫建立。

培養(yǎng)條件 DMEM-H：

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS  

傳代方法 1：

2傳代；3-4天一次  

傳代情況 P2

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè) 熒光法（-）

STR -

同工酶 無

染色體

使用權(quán)限 A類
幼兔肺成纖維樣細(xì)胞培養(yǎng)貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗(yàn))，晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線
Anti-FLAG Tag (CT)/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記 FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C9orf153 9號(hào)染色體開放閱讀框153抗體 規(guī)格 0.2ml

CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) 周期素依賴性激酶5抗原 0.5mg

HAPLN4 英文名稱： 透明質(zhì)酸及粘蛋白4抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SDCCAG8 結(jié)腸癌抗原8抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
LDH(Lactate Dehydrogenase) 乳酸脫氫酶抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Hepatocyte 人肝細(xì)胞單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Cas (Tyr165) 磷酸化細(xì)胞凋亡敏感性基因 規(guī)格 0.1ml

馬血清封閉液 10ml Gibco原料,2%血清

V.cholera Ogawa 英文名稱： 01群小川型霍亂弧菌抗體 0.2ml

phospho-DNA PKcs (Thr2638) 英文名稱： 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體 0.1ml

Anti-Hepatocyte 人肝細(xì)胞單克隆抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml

GNG11 英文名稱： G蛋白γ11/Gγ11 抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4 血管生成素3/血管生成素4抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化胰島素受體底物-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-horse IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格 0.5ml

Anti-Sema3A/FITC 熒光素標(biāo)記臂板蛋白3A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-Phospho-DARPP32 (Thr75) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化多巴胺、cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Lysozyme/FITC 熒光素標(biāo)記溶菌酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CANX/Calnexin 鈣連蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

DRD5 receptor(dopamine D5 receptor) 多巴胺受體-D5抗原 0.5mg

HERC3 英文名稱： HERC3 E3泛素蛋白連接酶抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh SGLT1/GLT 1 鈉-糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-Lysozyme/FITC 熒光素標(biāo)記溶菌酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。