詳細介紹
倉鼠卵巢細胞;Lec1價格懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
細胞名稱 倉鼠卵巢細胞;Lec1價格
形態(tài)特性 上皮細胞
品牌 貼壁生長
特征特性 Lec1 (原先叫做Pro-5wgaR1 3C)是從脯氨酸缺陷型的CHO克隆 Pro-5中挑選出來的能抗麥芽凝集素的突變株。 Lec1 缺乏稱作GlcNAc-T1的糖基轉移酶,從而N-連接碳水化合物被阻斷在Man5GlcNAc2Asn中間體。 對于研究N-連接糖基化改變對內源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA轉染產生的糖蛋白的功能和區(qū)隔化的影響,這些細胞十分有用。
培養(yǎng)條件 α-MEM:
Alpha Minimum Essential Medium (with N?
貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Insulin(1-51 protein)/FITC 熒光素標記胰島素1-51蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-RUNX1/AML1(phospho SerS303) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD45/CT117 /抗原117 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Cy3 Cy3標記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
GSTA3 英文名稱: 谷胱甘肽S轉移酶A3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格 0.1ml
Anti-RUNX1/AML1(phospho SerS303) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-ALR 肝再生增強因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Thr754) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規(guī)格 0.1ml
鏈酶蛋白酶濃縮液(20X) 1ml 1% pH 7.2
Vinexin 英文名稱: 細胞間粘附蛋白Vinexin抗體 0.1ml
phospho-DAAM1 (Thr361) 英文名稱: 磷酸化形態(tài)發(fā)生紊亂關聯(lián)激活因子1抗體 0.1ml
Anti-ALR 肝再生增強因子抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
FMDV Polyprotein (3D polymerase) 英文名稱: 口蹄疫病毒 0.2ml
細胞色素P450單氧化酶抗體 Anti-CYP450 0.2ml
Anti-Pan-ras/FITC 熒光素標記抗Pan ras抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tyk2(Tyr1054/1055) 磷酸化非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-bovine IgG/FITC 熒光素標記羊抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)/FITC 熒光素標記磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
dog IgM (親和純化) 狗IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg
丙型肝炎病毒-NS4a抗體 Anti-HCV-NS4a 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG 驢抗豚鼠IgG 1mg
FAM153B 英文名稱: FAM153B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KA1(Thr348) 磷酸化磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
dog IgM (親和純化) 狗IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 1mg