詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;2A3培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C20
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠雜交瘤細胞;2A3培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
Anti-MMP-3/FITC 熒光素標記基質(zhì)金屬蛋白酶-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-TRPM2 /FITC 熒光素標記瞬時受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh ABC2/C17orf71 癌增強蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/Bio 生物素標記的小鼠抗IgG 0.1ml
GPR18 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體18抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh R Cadherin R Cadherin/CDH4 規(guī)格 0.2ml
Anti-TRPM2 /FITC 熒光素標記瞬時受體電位離子通道蛋白抗體(M亞家族)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MEC/CCL28(Human mucosae associated epithelia chemokine) ELISA Kit 人粘膜相關上皮趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/APC APC標記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml
HSP-20(Human Heat Shock Protein 20) ELISA Kit 人熱休克蛋白20 96T
RTP4 英文名稱: 受體轉運蛋白4抗體 0.2ml
Phospho-cdc25A (Ser178) 英文名稱: 磷酸化細胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
Anti-GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rat Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit 大鼠cAMP反應元件結合蛋白 96T
TERT 英文名稱: 端粒酶逆轉錄酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Nkx2.5/Cardiac-specific homeobox 1 心臟特異性同源盒轉錄因子NKX2.5抗體 規(guī)格 0.2ml
RANTES 人趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
CEP164 英文名稱: 中心體蛋白CEP128抗體 0.1ml
Anti-CREB-1 環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
TGM2(human transglutaminase 2C polypeptide) ELISA Kit 人轉谷氨酰胺酶2C多肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-HRH4/GPCR105 組織胺H4受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗體 規(guī)格 0.1ml
DAO(Human diamine oxidase) ELISA Kit 人二胺氧化酶 96T
RARRES1 英文名稱: 視黃酸受體應答蛋白1抗體 0.1ml
COX7A2 英文名稱: 細胞色素c氧化酶7A2抗體 0.1ml
Anti-HRH4/GPCR105 組織胺H4受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。