詳細(xì)介紹
細(xì)胞名稱(chēng) 小鼠雜交瘤細(xì)胞;S-29-3培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
品牌 半貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞屬專(zhuān)利保藏,其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
小鼠雜交瘤細(xì)胞;S-29-3培養(yǎng)操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。
懸浮細(xì)胞: 一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
Anti-NCX3/FITC 熒光素標(biāo)記鈉鈣交換蛋白3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體 Anti-Amylin 0.1ml
Mouse Anti-human IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgM 0.1ml
GAPDHS 英文名稱(chēng): 3-磷酸甘油醛脫氫酶抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh PROK2/Prokineticin 2 前動(dòng)力蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-VEGF(Rabbit)/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
P III NP(Human N-terminal procollagen III propeptide) ELISA Kit 人Ⅲ型前膠原肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-IDE 胰島素降解酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MAP65/ASE 1 擬南芥MAP65蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
EAR3(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3)ELISA Kit 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員3 96T
RIMKLA 英文名稱(chēng): 核糖體蛋白S6修飾樣蛋白A抗體 0.2ml
Claudin 1 英文名稱(chēng): 緊密連接蛋白1抗體(C端) 0.2ml
Anti-IDE 胰島素降解酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SMC2 英文名稱(chēng): 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白2抗體 0.2mlphospho-ERK1 (Thr202+Tyr204) + ERK2 (Thr185+Tyr187) 英文名稱(chēng): 磷酸化原活化蛋白激酶ERK抗體 0.1ml
線粒體促凋亡蛋白抗體 anti-Smac/DIABLO 0.1ml
Anti-Tetraspan5/FITC 熒光素標(biāo)記四分子交聯(lián)體5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MAX protein(Tyr123) 磷酸化Myc基因相關(guān)X因子抗體 規(guī)格 0.1ml
MTLC (c-Myc target from laryngeal cancer cells)又稱(chēng):MYC 致癌基因(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-BNP/FITC 熒光素標(biāo)記腦鈉素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-GRB10/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CIP2A/p90 Autoantigen 蛋白磷酸酶PP2A癌抑制蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
CD25/IL-2RA(Imterleukm-2 Receptor alpha) CD25/白介素2-受體(抗原) 0.5mg
IKB epsilon 英文名稱(chēng): KB抑制蛋白激酶ε 0.1ml
Rhesus antibody Rh TORC1/CRTC1 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-GRB10/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml