詳細介紹
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;FES培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 細胞注射小鼠腹腔可產生高滴度的單抗,可用于基礎研究和臨床檢驗。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶 同工酶鑒定
染色體
使用權限 A類
小鼠雜交瘤細胞;FES培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,繪制細胞生長曲線
Anti-Nm23-H1/FITC 熒光素標記抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-XBP-1/FITC 熒光素標記細胞核轉錄因子X盒結合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
鼠抗人非受體型酪氨酸激酶BTK單克隆抗體 Anti-BTK 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標記的羊抗兔IgG 0.1ml
FUNDC1 英文名稱: X三體綜合征相關蛋白FUNDC1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PP2A beta/PPP2CB 蛋白質磷酸酶2B抗體 PP2A β PP2A-β 規(guī)格 0.1ml
Anti-XBP-1/FITC 熒光素標記細胞核轉錄因子X盒結合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
PF-4/CXCL4 ELISA Kit 大鼠血小板因子4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CD8/RBITC 羅丹明標記CD8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh FBXW8/FBXO29 FBXW8蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Beta-EPR ELISA Kit 大鼠β內啡肽受體 96T
MLCK 英文名稱: 肌球蛋白輕鏈激酶抗體 0.1ml
ABCD4 英文名稱: 三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白4抗體 0.2ml
Anti-CD8/RBITC 羅丹明標記CD8抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
SREBP-1 英文名稱: 膽固醇調節(jié)元件結合蛋白1抗體 0.1ml
FASN 英文名稱: 脂肪酸合成酶抗體 0.1ml
鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體 Anti-Mouse anti-human HAS 0.1ml
Anti-SCG3/SgIII /FITC 熒光素標記分泌粒蛋白Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體 規(guī)格 0.1ml
rDen-2(rh-Dengue Virus) 重組人登革熱病毒2型診斷抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 100ug
Anti-ER- Beta/FITC 熒光素標記雌激素受體β 抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-MuRF1/Trim63/FITC 熒光素標記肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh C19orf54 19號染色體開放閱讀框54抗體 規(guī)格 0.2ml
CA15-3 peptide 癌相關抗原抗原 0.2mg
HLA B27 英文名稱: 人類白細胞抗原B27 0.2ml
Rhesus antibody Rh RPL19 核糖體蛋白L19抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-MuRF1/Trim63/FITC 熒光素標記肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。