大鼠皮膚成纖維細(xì)胞系是原代培養(yǎng)的大鼠雪旺細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后自發(fā)轉(zhuǎn)化而成的[PubMed: 9766530]。 2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。 其后代通過(guò)BM 細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。 處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測(cè)試進(jìn)行支原體檢測(cè)。 結(jié)果都呈陰性。

大鼠皮膚成纖維細(xì)胞系是原代培養(yǎng)的大鼠雪旺細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后自發(fā)轉(zhuǎn)化而成的[PubMed: 9766530]。 2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。 其后代通過(guò)BM 細(xì)胞周期蛋白處理21天消除支原體。 處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)測(cè)試進(jìn)行支原體檢測(cè)。 結(jié)果都呈陰性。  

規(guī)格：5×105cells/瓶
培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，無(wú)菌恒溫培養(yǎng)。
細(xì)胞數(shù)量：1× 106個(gè)
細(xì)胞傳代：1:4~1:6傳代；每周換液2~3次
細(xì)胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
培養(yǎng)條件:DMEM（高糖） +10% FBS；37℃，5% CO2
傳代方法:建議1:2-1:3 兩天換液一次
凍存條件:90%FBS+10%DMSO
細(xì)胞凍存：液氮凍存?????

T25瓶細(xì)胞處理方法

收到大鼠皮膚成纖維細(xì)胞系后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱*培養(yǎng)基（含1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

②若細(xì)胞密度較大，達(dá)到80%以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基。（這里是針對(duì)原來(lái)*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來(lái)FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題，請(qǐng)當(dāng)天反饋并提供圖片，且保存前三天照片以便分析。7天內(nèi)反饋，細(xì)胞本身問(wèn)題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費(fèi)售后。