人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子Elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法（Sandwich ELISA）檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物

人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子Elisa試劑盒以用于檢測普通溶液、細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。細(xì)胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備，檢測靈敏度高達(dá)1nM，化學(xué)發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達(dá)30分鐘，并且獲得的樣品還可以同時進(jìn)行Western檢測。
      ATP，作為zui重要的能量分子，在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變，會影響細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP水平會下降；而高葡萄糖刺激等可上調(diào)某些細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細(xì)胞凋亡時ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發(fā)生。
     人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子Elisa試劑盒根據(jù)螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase，也稱熒光素酶)催化螢光素產(chǎn)生螢光時需要ATP提供能量研制而成。當(dāng)螢火
蟲螢光素酶和螢光素都過量時，在一定的濃度范圍內(nèi)螢光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測溶液中的ATP濃度。
      樣品制備簡單。本試劑盒提供了可以用于細(xì)胞和組織裂解的ATP檢測裂解液，簡單裂解后即可用于ATP檢測。無需進(jìn)行高氯酸或三氯乙(TCA)抽提，或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
      靈敏度高，線性范圍寬，在1nM至10μM范圍內(nèi)有良好檢測效果。本試劑盒在樣品體積為100微升時可以檢測濃度低達(dá)1nM的ATP。而常規(guī)的細(xì)胞或組織裂解液中ATP的濃度為0.1-1μM，一些常見細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測濃度范圍非常寬，檢測上限可以高達(dá)10μM，并在1nmol/L-10μM范圍內(nèi)可以形成良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
      讀數(shù)穩(wěn)定。本試劑盒進(jìn)行了特殊的優(yōu)化設(shè)計，使檢測ATP時的化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定。對于ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測結(jié)果顯示，在開始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無明顯下降，開始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降不超過10%。
      制備的樣品兼容性好。使用本試劑盒中的ATP檢測裂解液裂解獲得的細(xì)胞或組織樣品，不僅可以用于ATP檢測，還可用于檢測蛋白濃度、進(jìn)行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測。
      使用方便快捷。通常10-20個樣品可以在30-60分鐘內(nèi)測定完畢。
 

裝清單：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝
S0026-1	ATP檢測試劑	2ml(0.5ml/管，共4管)
S0026-2	ATP檢測試劑稀釋液	20ml
S0026-3	ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.5mM)	0.1ml
S0026-4	ATP檢測裂解液	100ml
—	說明書	1份

保存條件：
  -20℃保存，半年有效。-70℃保存，一年有效。ATP檢測試劑需避光保存。
注意事項：
      ATP檢測試劑中含有螢光素酶，反復(fù)凍融會導(dǎo)致其逐漸失活。盡管經(jīng)測試ATP檢測試劑反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無明顯影響，為取得較好的使用效果，建議用戶使用時的凍融次數(shù)不宜超過3次。ATP檢測試劑稀釋成ATP檢測工作液后，zui一次用完，不宜凍存后再使用。
      ATP，特別是裂解后樣品中的ATP在室溫不太穩(wěn)定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以穩(wěn)定長達(dá)6小時。
      本試劑盒需使用luminometer，即化學(xué)發(fā)光儀(檢測螢光素酶報告基因時所用的儀器)。如果沒有l(wèi)uminometer，也可以使用液閃儀。液閃儀的測定效果取決于液閃儀的檢測靈敏度和檢測精度。
      使用可檢測化學(xué)發(fā)光的多功能酶標(biāo)儀時，推薦使用孔和孔之間不透光的96孔白板或黑板。如使用普通的透明96孔板，須特別注意在檢測孔之間設(shè)置間隔孔，以減少鄰近孔之間的相互干擾。對于透明96孔板，一個發(fā)光孔可以使上下或左右鄰近孔的RLU值升高該孔的10-20%左右，使上下或左右間隔一個孔的鄰近孔的RLU值升高該孔的1%-4%左右；對于相同的樣品，底部不透光的96孔白板的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)可以達(dá)到透明96孔板的5-10倍左右，達(dá)到底部透光96孔白板讀數(shù)的3倍左右(實測數(shù)據(jù)會因96孔板、檢測儀器和樣品等的不同而存在差異)。
      本試劑盒提供的ATP檢測裂解液可以有效裂解并釋放常見的培養(yǎng)細(xì)胞和組織中的ATP。對于一些特殊的組織或樣品，如果發(fā)現(xiàn)檢測出來的ATP水平顯著低于預(yù)期水平，可以在裂解樣品后并且在離心前，取部分樣品煮沸2分鐘以充分釋放ATP。煮沸后樣品中的蛋白會變性，從而會在后續(xù)的離心步驟中被沉淀，因此煮沸的樣品不能用于蛋白濃度測定、SDS-PAGE和Western檢測?？梢允褂檬Ｓ嗟牟糠謽悠愤M(jìn)行蛋白濃度測定、SDS-PAGE和Western檢測。
     僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。