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詳細(xì)介紹
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1βElisa試劑盒是一種用于特異性地超高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿、細(xì)胞或組織裂解液、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的胰島素的ELISA試劑盒。zui少5μl小鼠血清即可檢測，5μl普通小鼠血清可以導(dǎo)致吸光度比本底增加約0.1(不同小鼠略有不同)，使用10μl小鼠血清檢測可以獲得非常理想的檢測數(shù)據(jù)。本試劑盒不僅適用于常規(guī)的小鼠血清胰島素水平檢測，還特別適合于糖耐量實(shí)驗(yàn)(Glucose tolerance test, GTT)時(shí)測定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血清胰島素水平。
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1βElisa試劑盒檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。zui小檢出量為0.1ng/ml，10μl 0.13ng/ml小鼠胰島素標(biāo)準(zhǔn)品可以導(dǎo)致吸光度比本底增加約0.1。與IGF-I、IGF-II、小鼠C肽、大鼠C肽均沒有交叉反應(yīng)，與豬胰島素、綿羊胰島素、大鼠胰島素、牛胰島素及人胰島素分別有628%、256%、146%、110%和195%交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
Insulin即胰島素，是由胰臟內(nèi)的胰島β細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，分子量約5.8kDa。胰島β細(xì)胞首先合成含有信號(hào)肽(24個(gè)氨基酸殘基)的前胰島素原(preproinsulin)，該信號(hào)肽將前胰島素原定位到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。前胰島素原的信號(hào)肽被剪切后形成胰島素原(proinsulin)，并被釋放到粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，隨后在其中形成3個(gè)二硫鍵并正確折疊。隨后胰島素原進(jìn)入高爾基體，經(jīng)蛋白水解酶的作用，生成C肽(C-peptide)和由A鏈和B鏈通過兩個(gè)二硫鍵連接起來的胰島素。1923年和1958年，胰島素的發(fā)現(xiàn)和其氨基酸序列測定都獲得了諾貝爾獎(jiǎng)。1965年，中國科學(xué)家實(shí)現(xiàn)人工全合成結(jié)晶牛胰島素，也是生命科學(xué)*的重要成果。胰島素的分泌主要受血糖水平的調(diào)控，血液中葡萄糖水平升高時(shí)，更多的葡萄糖通過GLUT2進(jìn)入β細(xì)胞，并產(chǎn)生更多的ATP，ATP水平的升高導(dǎo)致ATP敏感的SUR1/Kir6.2鉀離子通道關(guān)閉，使細(xì)胞內(nèi)鉀離子積聚，從而引起細(xì)胞膜去極化，引發(fā)電壓門(voltage-gated)鈣離子通道打開，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，zui終導(dǎo)致胰島素的分泌。胰島素的分泌分為兩個(gè)時(shí)段，*個(gè)時(shí)段通常受血糖調(diào)控，持續(xù)時(shí)間約為10分鐘；第二個(gè)時(shí)段是一個(gè)比較持續(xù)和緩慢的過程，通常分泌的高峰出現(xiàn)在*個(gè)時(shí)段后的2-3小時(shí)，并且不受血糖水平影響。胰島素的分泌不僅受葡萄糖調(diào)控，也受乳糖、核糖、精氨酸和亮氨酸等氨基酸、副交感神經(jīng)釋放的乙酰膽堿、腸道分泌的腸促胰島素(incretin)例如glucagon-like peptide-1 (GLP-1)和glucose-dependent insulinotropic peptide (GIP)、膽囊收縮素(cholecystokinin)、促胰島素分泌的磺脲(sulfonylruea)類藥物等的影響。胰島素的釋放可被緊張時(shí)釋放的去甲腎上腺素(norepinephrine)、交感神經(jīng)釋放的兒茶酚胺(catecholamine)、以及胰高血糖素等所抑制。
Insulin的信號(hào)通路是一個(gè)比較復(fù)雜的信號(hào)通路，主要是胰島素與屬于酪氨酸激酶的胰島素受體(Insulin receptor)結(jié)合，從而激活PI(3)K-Akt信號(hào)通路。Insulin的信號(hào)通路參見圖1。
胰島素的主要生物學(xué)功能是降低血糖，促進(jìn)合成代謝。胰島素可以促進(jìn)肝臟、肌肉、脂肪等器官和組織的葡萄糖攝入，抑制糖異生(gluconeogenesis)，促進(jìn)糖原合成等。同時(shí)胰島素也可促進(jìn)脂質(zhì)合成和儲(chǔ)存，抑制脂質(zhì)分解，促進(jìn)蛋白合成并抑制蛋白降解，促進(jìn)DNA和RNA合成，抑制自噬(autophagy)。胰島素分泌不足或胰島素敏感性下降，導(dǎo)致不能有效降低血糖，是糖尿病發(fā)生的主要原因。胰島素分泌過量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致低血糖，甚至出現(xiàn)驚厥、昏迷和休克。
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1βElisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記靶蛋白抗體后，辣根過氧化物酶標(biāo)記靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
保存條件：
除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB對(duì)人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍(lán)色，應(yīng)該停止使用。
加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致zui終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1βElisa試劑盒僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
其他相關(guān)產(chǎn)品如下：
人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 MKN-28 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人胃癌細(xì)胞 MKN-45 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 圓形
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MuM-2B RPMI-1640+10% FBS 貼壁 多角形
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MuM-2C RPMI-1640+10% FBS 貼壁 多角形
人黑色素瘤細(xì)胞 MV3 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人乳腺癌細(xì)胞 MX-1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
大鼠骨髓瘤細(xì)胞 Y3-Ag 1.2.3 DMEM+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1975 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞/小鼠白血病G-CSF依賴性細(xì)胞 M-NFS-60 RPMI-1640 +0.05 mM 2-mercaptoethanol +62 ng/mL rhM-CSF +10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人大腸癌細(xì)胞 PA319 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人胰腺癌細(xì)胞 PATU8988 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人前列腺癌細(xì)胞 PC-3M RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞 SF-295 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人胸膜瘤細(xì)胞 SMC-1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116 L-15 +10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人食管癌細(xì)胞 TE-13 DMEM +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 TG-905 RPMI-1640 +10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人血管內(nèi)皮細(xì)胞 VE RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人胚腎細(xì)胞（EBNA1基因修飾） 293E IMDM +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣，多角
人胚腎細(xì)胞（SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞） 293ET IMDM +10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣，多角
人胚腎細(xì)胞 293FT DMEM+10% FBS 懸浮 圓形
人胚腎細(xì)胞 2V6.11 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 A3 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 A7r5 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞 AML-193 IMDM+0.005mg/mL Insulin+0.005 mg/mL Transferrin+5ng/mL GM-CSF+5% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
小鼠黑色素瘤細(xì)胞 B16-F1 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞 B16-F10 DMEM+10% FBS 貼壁 梭形混上皮細(xì)胞樣
小鼠腦瘤細(xì)胞 BC3H1 DMEM+20% FBS 貼壁 多角形
人肝癌細(xì)胞 BEL-7405 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞 Beta-TC-6 DMEM+15% heat-inactivated FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠肝上皮細(xì)胞 BNL 1ME A.7R.1 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人乳腺癌細(xì)胞 BT-20 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 C3H/10T1/2, Clone 8 MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞 Caki-2 McCoy's 5A+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人肺退行性癌細(xì)胞 Calu-6 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CEM/C1 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人張氏肝細(xì)胞 Chang liver RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Detroit 562 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠T細(xì)胞 CTLL-2 RPMI-1640+10% FBS+100U/mL rmIL-2 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 Dami RPMI-1640+10% FBS 懸浮 巨核細(xì)胞
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞 E.G7-OVA RPMI-1640+0.05 mM 2-mercaptoethanol+0.4 mg/mL G418+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞 EB-3 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
牛胚氣管細(xì)胞 EBTr (NBL-4) MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人胚胎腎細(xì)胞（Asp-2基因修飾） FC33 DMEM+250μg/mL G418+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣，多角
小鼠骨髓瘤細(xì)胞 FO DMEM+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞 G1 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人腎癌Wilms細(xì)胞 G-401 McCoy's 5A+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
大鼠垂體瘤細(xì)胞 GH3 F-12K+15% horse serum+2.5% FBS 疏松貼壁，有漂浮的細(xì)胞簇 上皮細(xì)胞樣
小鼠肝癌細(xì)胞 H22 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
大鼠肝癌細(xì)胞 H4-II-E-C3 DMEM+20% horse serum+5% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人羊膜細(xì)胞 HA RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD2) OKT 11 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞 HB611 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人支氣管上皮樣細(xì)胞 HBE RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 HCC38 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化） Hce-8693 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人宮頸癌細(xì)胞 HeLa 299 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人宮頸癌細(xì)胞 HeLa S3 F-12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人肝癌細(xì)胞 Hep B1.2 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人包皮成纖維細(xì)胞 HFF-1 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞 hFOB 1.19 DMEM:F12+0.3 mg/mL G418+10% FBS 貼壁 多細(xì)胞形態(tài)
人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞 HFSF DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人胎兒胸腺細(xì)胞株 HFT-8810 DMEM+10% FBS 貼壁
人牙齦成纖維細(xì)胞 HGF-1 DMEM+20% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人肝癌細(xì)胞 HHCC DMEM+10% FBS 貼壁 上皮樣；多角形；成堆生長
人肝癌細(xì)胞 HKC DMEM/F12+5% FBS 貼壁 多角
人肺細(xì)胞 HLF-a MEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人骨肉瘤細(xì)胞 HOS MEM+10% FBS 貼壁 上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞均有
人胰腺腺泡上皮癌 HPAC F12+0.002mg/ml INS+0.005mg/ml transferrin+40ng/ml hydrocortisone+10ng/ml EGF+5% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 HS 683 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 HuT 78 IMDM+20% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
人十二脂腸腺癌 HuTu-80 MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
大鼠肝細(xì)胞 IAR20 MEM+20% FBS 貼壁 圓形、多角
人外周血B淋巴細(xì)胞 IM-9 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞 INS-1 RPMI-1640+10% FBS+50 μmol/ 貼壁 不規(guī)則，多角
大鼠骨髓瘤細(xì)胞 IR983F RPMI-1640+10% FBS 懸浮 圓形
小鼠單核巨噬細(xì)胞 J774A.1 DMEM+10% FBS 貼壁 單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞樣
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 K7M2 wt DMEM+10% FBS 貼壁 成骨細(xì)胞
人胃癌細(xì)胞 KATO III IMDM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人胚腎上皮細(xì)胞 KiMA MEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移) KP-N-NS RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 L Wnt-3A DMEM+0.4mg/mL G-418+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞
小鼠肺腺癌細(xì)胞 LA795 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
大鼠腹水癌細(xì)胞 LLC-WRC 256 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞
小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14 MC3T3-E1 Subclone 14 MEMα +10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣
人乳腺癌細(xì)胞 MCF 7B DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-157 L-15+10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細(xì)胞樣
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 MDA-MB-175VII L-15+10% FBS(不需CO2) 貼壁 上皮細(xì)胞樣
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