固醇類顯示法染色試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見(jiàn)圖2。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。

當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

      一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
固醇類顯示法染色試劑盒包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)    產(chǎn)品名稱    包裝
PI305-1    人IL-1β抗體預(yù)包被板    8孔×12條
PI305-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI305-3    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    10ml
PI305-4    人IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗體    10ml
PI305-6    辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin    10ml
PI305-7    洗滌液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    終止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2張
PI305-11    封板膜(白色)    2張
－    說(shuō)明書    1份
保存條件：
      除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事項(xiàng)：
      由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液。
      為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
      TMB對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
      如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過(guò)氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍(lán)色，應(yīng)該停止使用。
      加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
      不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
      充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
      本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致zui終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
      洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
      檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
      加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
     僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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