傳染性胃腸炎病毒PCR檢測試劑盒技術(shù)概論
聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑。
PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系：
　　　10×擴(kuò)增緩沖液 　 10ul
　　　4種dNTP混合物 　 各200umol/L
　　　引物 　　　　　 各10～100pmol　
　　　模板DNA 　　　 　 0.1～2ug　
　 　 Taq DNA聚合酶 　 2.5u　
　　　Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L
　　　加雙或三蒸水至　 100ul
PCR反應(yīng)五要素： 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
　　引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
　?、僖镩L度： 15-30bp，常用為20bp左右。
　?、谝飻U(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
　?、垡飰A基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
　　④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
　?、菀?’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
　?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
　?、咭锏奶禺愋裕阂飸?yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
傳染性胃腸炎病毒PCR檢測試劑盒使用及效果

CR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
　　?、僖锱c模板DNA特異正確的結(jié)合；
　　?、趬A基配對(duì)原則；
　　?、跿aq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
　　　④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論

聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑。
組織等粗制的DNA擴(kuò)增檢測。

對(duì)照試驗(yàn)
　1.陽性對(duì)照:在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對(duì)照，它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽性對(duì)照，其含量宜低不宜高(100個(gè)拷貝以下)，但陽性對(duì)照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽性標(biāo)本，其對(duì)檢測或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時(shí)，在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽性對(duì)照。
　2.陰性對(duì)照:每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對(duì)照。它包括①標(biāo)本對(duì)照:被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對(duì)照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照。②試劑對(duì)照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以監(jiān)測試劑是否污染。
　3.重復(fù)性試驗(yàn)
4.選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增
防止污染的方法H5N1禽流感熒光定量PCR檢測試劑盒（不含反轉(zhuǎn)錄）11-110（即11-AI-H5N1）50 T990元
miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒131042-2525次2997元點(diǎn)擊下載 131042miRNA熒光定量RT-PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)V1點(diǎn)0
O型、A型及Asia1型3個(gè)型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR檢測試劑盒11-177050次2190元點(diǎn)擊下載 11-1770 O型、A型及Asia1型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)v1點(diǎn)0
（古典豬瘟）豬瘟病毒RT-PCR檢測試劑盒11-423050次1990元點(diǎn)擊下載 11-4230 豬瘟病毒RT-PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)v1點(diǎn)1
埃博拉病毒PCR檢測試劑盒11-300
埃立克體PCR檢測試劑盒11-310
巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒11-330
巴西果仁PCR檢測試劑盒11-340
白喉棒狀桿菌PCR檢測試劑盒11-350
白色念珠菌PCR檢測試劑盒11-360
百日咳桿菌PCR檢測試劑盒11-37050次
阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因間序列(78bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒11-4380
阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因熒光PCR檢測試劑盒間序列(探針法）11-439050 T2990元
鼻病毒PCR檢測試劑盒11-390
鼻疽假單胞菌PCR檢測試劑盒11-400
鼻咽癌病毒PCR檢測試劑盒11-410
丙型脊髓灰質(zhì)炎病毒PCR檢測試劑盒11-43050 T
伯氏疏螺旋體PCR檢測試劑盒11-440
蠶白僵菌PCR檢測試劑盒11-460
蠶微粒子病PCR檢測試劑盒11-470
產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌PCR檢測試劑盒11-480
產(chǎn)氣莢膜梭菌C類磷脂酶基因(283bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒11-440050 T
產(chǎn)氣莢膜梭菌PCR檢測試劑盒11-500
腸道病毒EV70 PCR檢測試劑盒11-510
腸道病毒EV71 PCR檢測試劑盒11-520
腸道病毒EV71/柯薩奇病毒A16型2聯(lián)PCR檢測試劑盒11-560
腸道病毒通用型/EV71/柯薩奇病毒A16型3聯(lián)PCR檢測試劑盒11-580
腸道病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒11-5701990元50次
腸道腺病毒40型PCR檢測試劑盒11-590
腸道腺病毒41型PCR檢測試劑盒11-600
超級(jí)細(xì)菌PCR檢測試劑盒11-610
出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒11-620
傳染性法氏囊病病毒PCR檢測試劑盒11-630
傳染性非典型肺炎病毒PCR檢測試劑盒11-640
傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒11-650
11-660
創(chuàng)傷弧菌PCR檢測試劑盒11-680
大腸埃希菌(大腸O157)stx1(282bp)和stx2(584bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒11-4410
大腸埃希菌(大腸O157)stx1和stx2基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)11-442050 T2990元
大腸埃希氏菌(O157：H7)熒光定量PCR檢測試劑盒11-71050次2490元點(diǎn)擊下載 11-710 大腸埃希氏菌(O157：H7)熒光定量PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)v1點(diǎn)0
大腸桿菌(O1)PCR檢測試劑盒11-690
大腸桿菌(O139)PCR檢測試劑盒11-700
大腸桿菌0157熒光PCR檢測試劑盒11-220（即11-E.Coli0157）50 T2490元
大腸桿菌PCR檢測試劑盒11-720
大豆35S/SS PCR檢測試劑盒11-790
大豆NOS/SS PCR檢測試劑盒11-800
大豆PCR檢測試劑盒11-810
大豆RR PCR檢測試劑盒11-820
大豆RR/SS PCR檢測試劑盒11-830
大豆內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒11-840
大豆源性成分熒光PCR檢測試劑盒(探針法)11-18040250次3490元點(diǎn)擊下載 大豆源性成分熒光PCR檢測試劑盒（探針法）使用手冊(cè)1
大米BT63基因PCR檢測試劑盒11-850
大米CrylAc基因PCR檢測試劑盒11-860
單純皰疹病毒II型PCR檢測試劑盒11-880
單純皰疹病毒PCR檢測試劑盒11-890
單增李斯特菌PCR檢測試劑盒11-900
單增李斯特菌prfA基因(274bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒11-4440
單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)11-445050 T2990元
彈狀病毒PCR檢測試劑盒11-910
登革熱病毒PCR檢測試劑盒11-980
登革熱病毒Ⅰ、Ⅱ型PCR檢測試劑盒11-920
登革熱病毒Ⅰ、Ⅱ型分型PCR檢測試劑盒11-930
登革熱病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒11-940
登革熱病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒11-950
登革熱病毒Ⅲ、Ⅳ型PCR檢測試劑盒11-960
登革熱病毒Ⅲ、Ⅳ型分型PCR檢測試劑盒11-970
凋亡抑制蛋白Livin基因PCR檢測試劑盒11-530
凋亡抑制蛋白Survivin基因PCR檢測試劑盒11-540
丁型肝炎病毒巢式RT-PCR檢測試劑盒11-102050 T1990元
動(dòng)物源性成分(18S)PCR檢測試劑盒11-1030
對(duì)蝦白斑病毒熒光定量PCR檢測試劑盒11-104050次2490元點(diǎn)擊下載 11-1040 對(duì)蝦白斑病毒熒光定量PCR檢測試劑盒（外標(biāo)準(zhǔn)法）使用手冊(cè)v1點(diǎn)0
對(duì)蝦桿狀病毒PCR檢測試劑盒11-1050
多瘤病毒PCR檢測試劑盒11-1060
鵝特定基因序列PCR檢測試劑盒11-1070
鵝細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒11-1080
惡性瘧PCR檢測試劑盒11-50（即11-Pf）
非洲馬瘟病毒PCR檢測試劑盒11-1090
非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒11-230（即11-ASF）50次1490元點(diǎn)擊下載 11-230( 即11-ASF) 非洲豬瘟病毒PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)V1.2
肺耐藥蛋白基因PCR檢測試劑盒11-1110
肺炎鏈球菌PCR檢測試劑盒11-1120
肺炎衣原體PCR檢測試劑盒11-1130
肺炎支原體PCR檢測試劑盒11-1140
肺炎支原體熒光定量PCR檢測試劑盒（染料法）11-20（即11-Mp）點(diǎn)擊下載 11-Mp-50 肺炎支原體熒光定量PCR試劑盒（染料法）使用手冊(cè)v1點(diǎn)0
風(fēng)疹病毒PCR檢測試劑盒11-1150
麩質(zhì)Gluten基因PCR檢測試劑盒11-1160
副雞嗜血桿菌PCR檢測試劑盒11-1170
副結(jié)核分枝桿菌PCR檢測試劑盒11-1180
副結(jié)核桿菌PCR檢測試劑盒11-180（11-MP）50次1490元點(diǎn)擊下載 11-180 副結(jié)核桿菌PCR試劑盒
副流感病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒11-1190
副流感病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒11-1200
副流感病毒Ⅲ型PCR檢測試劑盒11-1210
副流感病毒Ⅳ型PCR檢測試劑盒11-1220
副溶血性弧菌PCR檢測試劑盒11-1230
副傷寒桿菌PCR檢測試劑盒11-1240
副豬嗜血桿菌熒光定量PCR檢測試劑盒11-160（11-HPS）50次2490元點(diǎn)擊下載 11-160 副豬嗜血桿菌定量PCR試劑盒
庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒11-1250
弓形蟲PCR檢測試劑盒11-126050次1490元點(diǎn)擊下載 11-1260弓形蟲pcr檢測試劑盒使用手冊(cè)v1
鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒11-1270
鉤狀螺旋體PCR檢測試劑盒11-170（即11-LI）50次1490元點(diǎn)擊下載 11-170 鉤狀螺旋體PCR試劑盒
冠狀病毒(229E/NL63)PCR檢測試劑盒11-1290
冠狀病毒(OC43/HKU1)PCR檢測試劑盒11-1300
冠狀病毒229E型核酸熒光PCR檢測試劑盒11-17120250次2990元
漢坦病毒PCR檢測試劑盒11-1330
漢坦病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒11-1310
漢坦病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒11-1320
紅薯內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒11-1350
猴痘病毒PCR檢測試劑盒11-1360
呼吸道合胞病毒A組RT-PCR檢測試劑盒11-138050次1990元
呼吸道合胞病毒B組PCR檢測試劑盒11-1390
胡桃PCR檢測試劑盒11-1410
花生PCR檢測試劑盒11-1420
花生內(nèi)源基因核酸PCR檢測試劑盒11-18010250次1490元點(diǎn)擊下載 11-180102 花生內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)1.0(1)
花生源性成分熒光PCR檢測試劑盒（探針法）11-18040350次3490元點(diǎn)擊下載 花生源性成分熒光PCR檢測試劑盒（探針法）使用手冊(cè)1
壞死梭桿菌PCR檢測試劑盒11-1430
霍亂弧菌PCR檢測試劑盒11-1480
霍亂弧菌熒光PCR檢測試劑盒11-270（即11-VC）50 T1990元
雞痘病毒PCR檢測試劑盒11-90（即11-FPV）
雞毒支原體PCR檢測試劑盒11-149050次1490元點(diǎn)擊下載 11-1490 雞毒支原體PCR檢測試劑盒使用手冊(cè)v1點(diǎn)0
雞特定基因序列PCR檢測試劑盒11-1500
基孔肯雅病毒PCR檢測試劑盒11-1510
即用型PCR檢測試劑盒列表29點(diǎn)擊下載 
脊髓灰質(zhì)炎病毒1型PCR檢測試劑盒11-1520
脊髓灰質(zhì)炎病毒2型PCR檢測試劑盒11-1530
脊髓灰質(zhì)炎病毒3型PCR檢測試劑盒11-1540