螢火蟲螢光素酶基因檢測(cè)試劑盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一種以螢光素
(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)活性的試劑盒。
      螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。生物螢光可以通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)原理參考圖1。

圖1. 螢火蟲螢光素酶的檢測(cè)原理圖。
      通過(guò)螢光素和螢光素酶這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測(cè)定螢光素酶活性。通過(guò)螢光素酶活性的高低來(lái)判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。
      螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的zui強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為560nm(centered around 560nm)。
      螢火蟲螢光素酶基因檢測(cè)試劑盒可以測(cè)定100個(gè)樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)    產(chǎn)品名稱    包裝
RG005-1    報(bào)告基因細(xì)胞裂解液    60ml
RG005-2    螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑    10ml
—    說(shuō)明書    1份
保存條件：
      報(bào)告基因細(xì)胞裂解液4℃保存3個(gè)月有效，-20℃保存一年有效；螢光素酶檢測(cè)試劑-20℃避光保存6個(gè)月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事項(xiàng)：
      為取得*測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。
      由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
      為保證螢光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫。經(jīng)測(cè)試，反復(fù)凍融三次，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。
      樣品和測(cè)定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測(cè)定更長(zhǎng)或更短時(shí)間，但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。
      為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)細(xì)胞時(shí)效率的差異而帶來(lái)的誤差，可以同時(shí)轉(zhuǎn)入海腎螢光素酶(Renilla luciferase)的報(bào)告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，采用碧云天的雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(RG027/RG028)進(jìn)行檢測(cè)；也可以同時(shí)轉(zhuǎn)入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)報(bào)告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，然后采用碧云天生產(chǎn)的β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(RG0036)進(jìn)行檢測(cè)。采用本試劑盒中的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液裂解獲得的樣品可以直接用于β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(RG0036)的檢測(cè)。
      僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。