目錄:鏡像綺點(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司>>細(xì)胞分類>>細(xì)胞系>> 293T細(xì)胞HEK-293T人胚腎細(xì)胞/STR鑒定
純度 | 90% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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規(guī)格 | 1*10^6 | 貨號 | iCell-h237 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研用途 |
HEK-293T人胚腎細(xì)胞/STR鑒定
細(xì)胞介紹
HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實驗,轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時),即可進行轉(zhuǎn)染操作)
細(xì)胞特性
1) 來源:人胚胎腎臟
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長,貼壁能力較弱
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)半貼細(xì)胞和貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用wan全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的wan全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
HEK-293T人胚腎細(xì)胞/STR鑒定
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM(推薦iCell-0001)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;L-谷an酰胺(2mM)1%;NEAA 1% ; 雙抗 1%
注意:1.該細(xì)胞貼壁能力較弱,培養(yǎng)時可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿。wan全培養(yǎng)液中需添加熱滅活胎牛血清。細(xì)胞生長不能過密,過密細(xì)胞容易脫落,脫落下來的細(xì)胞可以通過離心收集,使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續(xù)培養(yǎng)。
2.如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁,漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象,請確認(rèn)所使用的DMEM中碳suan氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度。并參考以下培養(yǎng)體系:
a) DMEM由1.5 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用5%CO2培養(yǎng)箱。
b) DMEM由3.7 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用10%CO2培養(yǎng)箱。
當(dāng)使用碳suan氫鈉含量高的培養(yǎng)基時,必須將這些細(xì)胞在10%CO2中孵育,以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒有適當(dāng)緩沖時,239T細(xì)胞雖然可以存活,但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90?S,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mlwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白mei0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
鏡像綺點(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù):
一、原代細(xì)胞服務(wù)
各類模式哺乳動物的多種原代細(xì)胞資源;
多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源;
原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等;
原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù);
二、細(xì)胞株/系服務(wù)
細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書;
細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo);
細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等;
三、iPS細(xì)胞
iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在);
iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存;
iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí);
新藥及實驗儀器上市前評估;
四、技術(shù)外包服務(wù):各類細(xì)胞生物學(xué)實驗、分子生物學(xué)實驗、顯微鏡拍照服務(wù)等
五、其他:根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)