以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Doramapimod是一種高效的p38α抑制劑,IC50為4nM,也抑制B-Raf和Abl,IC50分別為83nM和14.6μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):285983-48-4 別名:BIRB 796 純度:99.40% 分子量:527.66 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母血管緊張Ⅱ受體2抗體Human LCE1B ELISA Kit小鼠戊型肝炎病(HEV)抗體(IgG)免疫試劑盒
纖維黃鏈霉菌ASH1蛋白抗體Human LARS ELISA Kit小鼠戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒
米川黃桿菌芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?/span>2抗體Human LCK ELISA Kit小鼠胃泌調(diào)節(jié)免疫試劑盒
鏈輪枝菌屬血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體Human LARP4 ELISA Kit小鼠胃泌(Gastrin)免疫試劑盒
阪崎腸桿菌糖還原相關(guān)蛋白質(zhì)抗體Human LARS2 ELISA Kit小鼠胃動(dòng)(MTL)免疫試劑盒
嗜線蟲賽雷氏菌膽汁結(jié)合蛋白DDH2抗體Human LARP4 ELISA Kit小鼠胃蛋白(PG)免疫試劑盒
蠟?zāi)傺苌蓸拥鞍?/span>3抗體Human LARP4 ELISA Kit小鼠維生K1(VK1)免疫試劑盒
小海螺菌甘油酯激線粒體抗體Human LARP4 ELISA Kit小鼠維生E(VE)免疫試劑盒
栗疫病菌磷化內(nèi)收蛋白a1抗體Human LARS2 ELISA Kit小鼠維生D3(VD3)免疫試劑盒
肋生鹽弧菌肋生亞種自噬體ATG16L2蛋白抗體Human LARS ELISA Kit小鼠維生D2(VD2)免疫試劑盒
教堂小短桿菌性磷抗體Human Langerin ELISA Kit小鼠維生D(VD)免疫試劑盒
多產(chǎn)色鏈霉菌性磷抗體Human LAS1L ELISA Kit小鼠維生C(VC)免疫試劑盒
大腸埃希菌光激A相互作用蛋白1抗體Human KRT80 ELISA Kit小鼠維生B6(VB6)免疫試劑盒
小單孢菌載脂蛋白樣蛋白6抗體Human KRT6B ELISA Kit小鼠維生B12(VB12)免疫試劑盒
ATP 熒光儀凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體Human KC1 ELISA Kit小鼠維生A(VA)免疫試劑盒
大腸埃希菌A2LD1蛋白抗體Human KRT81 ELISA Kit小鼠微管相關(guān)蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>30%,Ind Grade白色念珠菌試劑盒纈草
: =BCRC17944=JCM21735=IAM15284=CCTCCAB205006資源名稱: 藤黃色土生單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí)白三烯E4試劑盒關(guān)附
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:BR,UV>30%白三烯D4試劑盒旋復(fù)花內(nèi)酯
p38α抑制劑(Doramapimod)木栓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nobiletin絲裂原活化蛋白激激激4抗體包裝50g
木通乙苷B;荷苞花苷B英文名稱: Toosendanin神經(jīng)分化因子6抗體包裝100g
木犀草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetramethylpyrazine同源盒蛋白Meis2抗體包裝25g
木犀草-7-O-葡萄糖苷英文名稱: TetramethylpyrazineMeteorin神經(jīng)膠質(zhì)分化調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g
木犀草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Asperosaponin Ⅵ棕櫚?;さ鞍?抗體包裝1g
木香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dipsacoside B腦蛋白239抗體包裝5g
木香烴內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Irisflorentin同源盒蛋白MEIS3抗體包裝1g
苜蓿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ononin顆粒分化蛋白抗體包裝25g
耐斯糖;蔗果四糖三合物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eleutheroside E單氧化A+B抗體包裝5g
南板藍(lán)根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ciwujianoside B膜蛋白相互作用蛋白R(shí)GS16抗體包裝1g
南鶴虱(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Octyl acetate膜型絲蛋白2抗體包裝250 mg
南沙參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Plantamajoside多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體包裝1g
南山楂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DaidzinMob1同源蛋白MOBKL2B抗體包裝5g
南五味子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ChrysophanolMob1同源蛋白MOBKL2C抗體包裝100g
鬧羊花II英文名稱: Emodin復(fù)合型表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝1g