以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Zileuton是一種有效的,選擇性的5-lipoxygenase抑制劑,具有抗炎的作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):111406-87-2 別名:A 64077;Abbott 64077 純度:99.84% 分子量:236.29 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
藤黃短小桿菌鹽轉(zhuǎn)運(yùn)三磷腺苷抗體Human MAN1A2 ELISA Kit小鼠ELISA Kit
蘇云金芽胞桿菌櫪木亞種精tRNA的蛋白轉(zhuǎn)移1抗體Human MAP4K4 ELISA Kit小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)免疫試劑盒
南方鹽單胞菌共濟(jì)失調(diào)蛋白7樣1抗體Human MAP7 ELISA Kit小鼠組織型纖溶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒
疣孢鏈霉菌孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體(自閉癥相關(guān)蛋白1)Human MAN2B2 ELISA Kit小鼠組織多肽抗原(TPA)免疫試劑盒
聚生殼菌脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體Human MANBAL ELISA Kit小鼠組織蛋白去乙酰化2(Hdac2/Yy1bp)免疫試劑盒
傳染性法氏囊病病芳香基硫酯H抗體Human MAP7 ELISA Kit小鼠組織蛋白K(cath-K)免疫試劑盒
青霉屬溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體Human MAP4K5 ELISA Kit小鼠組蛋白脫乙酰(HDAC1)免疫試劑盒
水稻節(jié)桿菌載脂蛋白1抗體Human MANEA ELISA Kit小鼠組蛋白去乙?;?(HDAC4)免疫試劑盒
暗黑鏈霉菌突觸融合結(jié)合蛋白6抗體Human MAP4K3 ELISA Kit小鼠組蛋白去乙?;?(HDAC3)免疫試劑盒
挪威假絲酵母精1抗體Human MALT1 ELISA Kit小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)免疫試劑盒
平滑假絲酵母腺苷激結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human MAML1(Mastermind-like protein 1) ELISA Kit小鼠組(HIS)免疫試劑盒
盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢三磷腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體Human MAML3 ELISA Kit小鼠總蛋白C(TPC)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣假黃單胞菌磷化鈉ATPα1多肽抗體Human MAN2B2 ELISA Kit小鼠總膽紅(TB)免疫試劑盒
小孢鏈霉菌Na+/K+-ATPase α1 鈉ATPα1抗體Human MAN1A2 ELISA Kit小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)免疫試劑盒
磚紅鐮刀菌肌動(dòng)蛋白樣蛋白6B抗體Human MANBAL ELISA Kit小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒
大腸埃希菌脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白7抗體Human MANEA ELISA Kit小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒
彩色豆馬勃Pisolithus│tinctorius (Pers.) Coker & Couch 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR表皮活化肽因子試劑盒鹽伊立替康
云芝Trametes│versicolor (L.) Lloyd 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白7試劑盒愈創(chuàng)木酚
溶血不動(dòng)桿菌基因型4Acinetobacter│haemolyticus/genospecies 4 質(zhì)量規(guī)格:AR,≥99%表皮生長(zhǎng)因子受體2試劑盒氧化石蒜堿
5-lipoxygenase抑制劑(Zileuton)靈芝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ECG 酪磷受體相互作用蛋白Liprin α1抗體包裝5g
靈芝內(nèi)酯B英文名稱: Rebaudioside A線粒體離子肽1抗體包裝1g
靈芝A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rebaudioside A微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體包裝1g
靈芝 B英文名稱: Cycloleucine Methyl Ester.HCl假定腫瘤抑制亮拉鏈蛋白1抗體包裝25g
靈芝A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GLT003乳脫氫LDH-C(腫瘤/抗原32)抗體包裝5g
靈芝C2英文名稱: Trisbromoneopentyl Alcohol 腫瘤抑制基因LUCA15抗體包裝100g
靈芝D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GLT001特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體包裝25g
靈芝D2英文名稱: TricineRNA聚合相關(guān)蛋白LEO1抗體包裝500g
靈芝F(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tricine磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體包裝1g
靈芝G(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SAR245409 (XL-765)磷化特異性蛋白酪激抗體包裝5g
靈芝I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TES Sodium低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體包裝500ug
靈芝LM2英文名稱: TES磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體包裝5g
靈芝二英文名稱: TAPSO monosodium磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
靈芝烯D英文名稱: TAPSO蘇蛋白激LKB1抗體包裝1g
凌霄花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TAPS Sodium Salt低分子量蛋白7抗體包裝1g