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          上海谷研實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>>Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒

          Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒

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          • 所在地 上海市

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          更新時間:2022-04-21 10:04:41瀏覽次數(shù):253

          聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 20次|50次
          貨號 GOY-01X9534 應用領域 化工
          主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研 英文名稱 Annexin?V-EGFP?Apoptosis?Detection?Kit
          Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:Adiponectin 脂聯(lián)素抗體環(huán)戊烷 99%(GC)
          ADM/AM 腎上腺髓質(zhì)素抗體4--3-酚 99%
          ADM (ProAM-N20) 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)膽固 99%
          ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體3-酚 分析標準品
          ADNP/NAP 活性依賴的神經(jīng)保護肽抗體皮質(zhì)甾酮 98%
          ADORA3 腺苷受體

          詳細介紹

          商品介紹:

          本試劑盒是用EGFP標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個樣品??梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。

          試劑盒組份:

          Annexin V-EGFP—————————100μl

          Annexin V-EGFP結合液——————12ml

          碘化丙啶染色液—————————220μl

          Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結合蛋白,參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。

          Annexin V選擇性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側(cè),即與細胞漿相鄰的一側(cè)。在細胞發(fā)生凋亡的早期,不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面,即細胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。

          用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標記的Annexin V,即Annexin V-EGFP,就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。

          本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液,碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞,呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細胞,由于細胞膜的完整性已經(jīng)喪失,Annexin V-EGFP可以進入到細胞漿內(nèi),與位于細胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結合,從而也使壞死細胞呈現(xiàn)綠色熒光。

          綜上所述,用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后,正常的活細胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色;凋亡早期的細胞僅被Annexin V-EGFP染色,碘化丙啶染色呈陰性;壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。

          儲存條件:4℃避光,有效期6個月。

          以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:

          中文名稱

          英文名稱

          產(chǎn)品規(guī)格

          發(fā)貨周期

          Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒

          Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit

          20次|50次

          1~3天


          操作步驟:

          1. 樣品染色

          1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。

          2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。

          對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。

          3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。

          4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

          5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。

          2. 樣品檢測

          1) 流式細胞儀檢測:

          染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。

          建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

          2) 熒光顯微鏡檢測:

          染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
          公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

          一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

          1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

          2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

          3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。

          二.細胞處理:

          1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

          2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

          對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

          方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

          血管緊張轉(zhuǎn)化2(ACE2)英文名稱:ACE2 ELISA Kit芳香烴受體抗體包裝5g

          血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)英文名稱:ACE ELISA Kit吸引抗體包裝1g

          血管緊張原(aGT)英文名稱:aGT ELISA Kit腺苷三磷結合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體包裝5g

          血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)英文名稱:AT2R ELISA Kit蛋白激B2包裝1g

          血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)英文名稱:ANG-Ⅱ ELISA Kit血管生成2抗體包裝25g

          血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)英文名稱:Ang-Ⅰ ELISA Kit芳香化/色P450/雌激合成抗體包裝5g

          血管緊張1-7(Ang1-7)英文名稱:Ang1-7 ELISA Kit腺苷A2A受體抗體包裝1g

          血管活性腸肽(VIP)英文名稱:VIP ELISA Kit蛋白激A錨定蛋白95抗體包裝25g

          溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)英文名稱:BrdU ELISA Kit頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運體蛋白抗體包裝5g

          雄烯二(ASD)英文名稱:ASD ELISA Kit去整合樣金屬蛋白8抗體包裝10MG

          雄激受體(AR)英文名稱:AR ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?抗體包裝50MG

          性激結合球蛋白(SHBG)英文名稱:SHBG ELISA KitACN9蛋白抗體包裝250mg

          信號轉(zhuǎn)導分子7(Smad7)英文名稱:Smad7 ELISA Kit雙鏈RNA腺苷脫基抗體(N端)包裝50MG

          信號轉(zhuǎn)導分子1(Smad1)英文名稱:Smad1 ELISA Kit腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g

          新生狀腺(NN-T4)英文名稱:NN-T4 ELISA Kit腺苷激抗體包裝25mg

          肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體白介4(IL4)Pritelivir (BAY 57-1293) is a potent helicase primase inhibitor, exhibiting anti
          Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒佩特曲霉 環(huán)磺酰氯MEK激酶檢測試劑盒

          膠孢 2-乙基吡MEST檢測試劑盒

          美麗短芽孢桿 1-萘酸microRNA-210檢測試劑盒

          奇異球 反式-鄰溴肉桂Spondin-2;mindin檢測試劑盒

          根瘤 1-溴-3,4,5-三氟苯MRP-14檢測試劑盒

          紅曲紅曲 4-溴-3-甲基吡唑腎上腺髓質(zhì)前體中段肽檢測試劑盒

          短桿狀馬賽 4-甲酸叔丁酯MxA蛋白檢測試劑盒

          傘枝犁頭霉 2,5-二溴對苯二甲酸NADH-色素b5還原酶檢測試劑盒

          摩洛哥芽孢桿 4-氯-6-乙基-5-氟嘧啶Na-K-ATP酶檢測試劑盒

          囊孔附毛 L-(+)-扁桃酸乙酯nectin-4檢測試劑盒

          膠孢 環(huán)己基雙苯膦氧化物NOD樣受體1檢測試劑盒

          黑曲霉 N,N'-(4,4'-亞甲基二苯基)雙馬來酰亞NOD樣受體-2檢測試劑盒

          *蟲擬蠟 鄰甲基三氟甲苯跨膜受體蛋白Notch-1檢測試劑盒

          瓦克青霉 二丁基二硫代氨酸鋅N端前腦鈉素檢測試劑盒

          印度不動桿 2,4,5-基噻唑N端中段骨鈣素檢測試劑盒



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