產(chǎn)品名稱:己糖激酶(HK)測試盒品牌
規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣
測試方法:微量法、紫外分光光度法
貨號:YS-01S6461
測定意義
HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
測定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 。
4 ). 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
Anti-PDE4D/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸二酯酶4D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Dog IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗狗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α抗體 Anti-Dnmt3a 0.1ml
Goat Anti-human IgG/FITC FITC標(biāo)記的羊抗人IgG 0.3ml
FRG2B 英文名稱: FRG2B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-TRADD(Ser269) 磷酸化壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Dog IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗狗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
Lgr5/GPR49 腸上皮干細(xì)胞蛋白(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-CaMKII (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 規(guī)格 0.1ml
Avidin阻擋劑 10ml Sigma原料
VANGL2 英文名稱: 神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體 0.2ml
DMAP1 英文名稱: DNA甲基轉(zhuǎn)移酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
Anti-AGEs 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
AP180 英文名稱: 裝配銜接蛋白180抗體 0.2ml
EGR3 英文名稱: 早期生長反應(yīng)蛋白3抗體 0.1ml
抗甲狀腺過氧化物酶抗體 Anti-TPO 0.1ml
Anti-TPO/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗甲狀腺過氧化物酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ITGB4(Tyr1530) 磷酸化整合素β4抗體 規(guī)格 0.1ml
PP-2B alpha 1 蛋白磷酸酯酶-2B 催化亞單位(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
己糖激酶(HK)測試盒品牌六水硫酸鈷銨(>98%,BR)(R型)人參皂苷Rh2ACTIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
草酸鈷(>99%,BR)白花前胡甲素GPDGP(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
萘酸鈷白花前胡素APC(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
刀豆素A(> 95%,BR)貝母辛CDK2(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
溴化亞銅(>98%,BR)地奧司明CDK3(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
無水乙酸銅(>99%,BR)香蒲新苷CDK4(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
溴化銅(>99%,BR)哈巴俄苷CDK6(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)
檸檬酸銅(>98.5%,BR)哈巴苷P16(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)