牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
【產(chǎn)品名稱】牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma bovis
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6970
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
Rutin張力蛋白4檢測(cè)試劑盒20mg

酚-3-葡萄糖鼠李糖苷 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格： 20mg 人視黃醇結(jié)合蛋白1（RBP1）ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL大鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員12(TNFSF12)ELISA試劑盒，英文名：TNFSF12 ELISA Kit

MatrineALPHA-乳白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人腺苷蛋氨脫羧酶(AMD1)Polyclonal Antibody 0.2ml

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Astilbin真核起始因子4A  II檢測(cè)試劑盒20mg

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98%100g50g性酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(二鈉比色法)Prepro adrenomedullin

硬脂(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) Stearic acid

Rabbit Antihorse IgG Whole serum  兔抗馬IgG抗血清進(jìn)口、分裝亞鐵螯合酶檢測(cè)試盒1gHuman/人Elisa試盒4836139

98%5g10g性酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(二鈉比色法)Actin IgA

 大鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Rabbit AntiHRP Whole serum  兔抗HRP抗血清進(jìn)口、原裝ABO組織血型系統(tǒng)轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試盒5gHuman/人Elisa試盒4836139

98%1g500g性酶(ALP)檢測(cè)試劑盒(二鈉比色法)tissue transglutaminase

L-山梨糖(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 L-(-)-Sorbose

Vitamin PP Assay Broth250精氨酶檢測(cè)試盒5mg睪檢測(cè)試盒argininevasopressin
牛支原體探針法熒光定量PCR試劑盒茶堿 ;Theophylline CAS號(hào)： 58559 規(guī)格： 100mg 訂購(gòu)|咨詢

刺五加葉中;Hederasaponin CAS號(hào)： 36284772 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

長(zhǎng)梗冬青苷;Pedunculoside CAS號(hào)： 42719324 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

重樓皂苷Ⅶ;Polyphyllin VI CAS號(hào)： 76296758 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

重樓皂苷Ⅵ;Polyphyllin VI CAS號(hào)： 55916513 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

重樓皂苷II;Chonglou Sapo CAS號(hào)： 76296725 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

重樓皂苷I;Chonglou Sapon CAS號(hào)： 50773416 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

粗莖頭堿;Crassicauline CAS號(hào)： 79592919 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

橙黃Ⅳ;Orange IV CAS號(hào)： 554734 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

橙黃Ⅱ;Orange Ⅱ CAS號(hào)： 633965 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

橙黃Ⅰ;Orange I CAS號(hào)： 523444 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

α常春藤皂苷;AHederin CAS號(hào)： 35790955 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

蟲草素;Cordycepin CAS號(hào)： 73030 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

常春藤皂苷元;Hederagenin CAS號(hào)： 465996 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

蟾毒靈;Bufalin CAS號(hào)： 465214 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢