豬滑液支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱】豬滑液支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma hyosynoviae
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6983
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類(lèi)產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
豬滑液支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
98%1g25g澤瀉醇O63231663matrix metalloproteinase 13

泮托拉唑鈉1.5水合物(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品 PantoprazoleSodium Sesquihydrate

Buddleoside氨苯鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人腸堿性酶(CIAP)Polyclonal Antibody 0.2ml

VPI(Human vasopeptidase inhibitors) ELISA Kit  人血管活性肽酶抑制CAS號(hào)：110178 總酚檢測(cè)試盒1mgHuman/人Elisa試盒3057747

97%500g100g25脫水澤瀉醇Fmatrix metalloproteinase 12

 大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Shikimic acid氨苯鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)Polyclonal Antibody 0.2ml

CMLC1(Human Cardiac myosinlight chains 1) ELISA Kit  人心肌肌凝蛋白輕鏈1CAS號(hào)：110167 生物堿檢測(cè)試盒50mgHuman/人Elisa試盒305808199

98%100g25g抗酒石性酶(TRAP)檢測(cè)試劑盒(PNP比色法)coagulation factor III

 WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Rabbit AntiMeiiones Unguiculataus MilmeEdwauds Whole serum  兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG抗血清進(jìn)口、分裝腦特異性抗體檢測(cè)試盒5gHuman/人Elisa試盒4863916

98%5g1g抗酒石性酶(TRAP)檢測(cè)試劑盒(PNP比色法)coagulation factor I

二甲基亞砜(Standard for GC,≥99.95%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.95%(GC) Dimethyl sulfoxide

Donkey Antihuman IgG Whole serum  驢抗人IgG抗血清進(jìn)口、原裝基孔肯尼亞病抗體檢測(cè)試盒100gHuman/人Elisa試盒4863916

95%1g5g性酶(ACP)檢測(cè)試劑盒(麝香草酚肽比色法)MG7Antigen

 人結(jié)腸細(xì)胞英文名稱：HCT-15

Eugonic Agar250抗呼吸道合胞病抗體檢測(cè)試盒5mg上腺素檢測(cè)試盒ThyroidStimulatingHormone
豬滑液支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒1;4醌（對(duì)醌）;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品; CAS號(hào)： 106514 規(guī)格： 0.25g 訂購(gòu)|咨詢

維生素E;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品(α生育); CAS號(hào)： 21590 規(guī)格： 0.5g 訂購(gòu)|咨詢

雙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 461585 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

維生素K3;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 58275 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

靛藍(lán);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 482893 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

膽固;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 57885 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

L色氨;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 73223 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

托品;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 529646 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 137406 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

脫醋;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū)脫 CAS號(hào)： 4418262 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

鳥(niǎo)嘌呤核苷(鳥(niǎo)甙);純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS號(hào)： 118003 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

次黃嘌呤核苷(?。?純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有 CAS號(hào)： 58639 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

D水蘇糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS號(hào)： 470553 規(guī)格： 1g 訂購(gòu)|咨詢

香蘭素;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū);純品 CAS號(hào)： 121324 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢

低聚果糖套裝(蔗果三糖;蔗果四糖;蔗果五 CAS號(hào)： 470699，13133078，59432609 規(guī)格： 20mg*3 訂購(gòu)|咨詢
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。