實驗過程：
一、巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Nocardia brasiliensis
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品：
98%10g5ml姜狀三七苷R18013750colonystimulating factor

五水合金雀花堿/鷹爪豆堿 質量規(guī)格：≥97%,BR (-)-Sparteini Sulfas

Betaine阿米替林相關物質A標準品規(guī)格：規(guī)格：人載脂蛋白A4(apo-A4)CLIA試劑盒 0.2ml

MYS(Human Myosin) ELISA Kit  人肌球蛋白CAS號：1076198178 β類胡蘿卜素檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒307244

98%100g25ml5基奈酚; 5基莰非醇86737very low density lipoprotein Receptor

 糖培養(yǎng)基/Lactose Medium250克國產/進口

Betaine hydrochloride阿米替林相關物質B標準品規(guī)格：規(guī)格：人金屬肽酶含血小板反應蛋白1(ADAMTS1) CLIA試劑盒 0.2ml

GS(Human Gelsolin) ELISA Kit  人凝溶膠蛋白CAS號：107437葉黃素檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒307244

土荊; 土槿皮6TET 亞酰5mg

二甲四(標準品) 質量規(guī)格：分析標準品 MCPA

MBP(Myelin Basic Protein, MBP)peptide  髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)現(xiàn)貨供應可溶性瘦素受體檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4903360

阿曼托黃6HEX 亞酰5mg

 制霉菌素檢定培養(yǎng)基/Nystatin Medium250克國產/進口

Bursin  囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽*煙堿型酰膽堿受體抗體檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4906245

99%5g1g5′核苷酶(5′NT)檢測試劑盒(鉬藍比色法)cholinesterase

油甲酯(分析標準品,>99.0%(GC)) 質量規(guī)格：分析標準品,>99.0%(GC) Methyl oleate

NPY ( Neuropeptide Y)136  神經肽 Y（136多肽）進口、分裝愛潑斯坦爾病潛伏膜蛋白2A檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4906245
巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒酰黃芪皂苷I CAS號： 84687478 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

鹽去駱駝蓬堿 CAS號： 343271 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購|咨詢

右旋四巴馬汀 CAS號： 3520147 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購|咨詢

原百部次堿 CAS號： 169534854 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

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使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。