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細(xì)胞常見(jiàn)的保存方法
閱讀：1219 發(fā)布時(shí)間：2017-7-4原代細(xì)胞保存溫度越低，保存時(shí)限更長(zhǎng)；溫度越低，對(duì)細(xì)胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見(jiàn)保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時(shí)限。
保存條件 溫度°C 大約時(shí)間
瓊脂平板 4 4-6周
（AgarPlate）
穿刺培養(yǎng)基 4 3周-1年
（stabculture）
冰凍 -20 1-3年
超低溫冰凍 -20 1-10年
凍干 ≤4 15年+
但是，具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長(zhǎng)時(shí)間，就要視情況而定了，并沒(méi)有一個(gè)*答案，上表中所列出來(lái)的時(shí)限一般來(lái)說(shuō)是適用大部分細(xì)菌樣本的。小編如果要保存一個(gè)細(xì)胞樣本，一般不會(huì)費(fèi)時(shí)費(fèi)力來(lái)查這個(gè)表的，那怎么辦？問(wèn)師兄，找?guī)熃憧﹡
短期保存
上表中的瓊脂平板和穿刺培養(yǎng)基都適合于短期保存。這兩種方法都保存在4度冰箱，為避免雜菌，用塑料或封口膜（parafilm）對(duì)平板或培養(yǎng)瓶進(jìn)行封口，這樣可以拒絕冰箱內(nèi)本身存在的雜菌、霉菌入侵樣本，也可以防止自己的培養(yǎng)基過(guò)快失水而變得干燥。小編就曾有一盤(pán)放在4度冰箱的菌落樣本，忘記了封口，一個(gè)月后，菌落和瓊脂都變成了木乃伊T_T
長(zhǎng)期保存
長(zhǎng)期低溫冰凍必然會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡，而且很多時(shí)候我們要把原代細(xì)胞樣本拿來(lái)重新接種做實(shí)驗(yàn)，所以解凍再凍的過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度，這樣在以后保存的過(guò)程中就算死亡一些細(xì)胞，我們也還有很多有效細(xì)胞可以用，一般來(lái)說(shuō)這個(gè)起始細(xì)胞密度要達(dá)到10的七次方的樣子（單位：細(xì)胞/mL）。
除了常見(jiàn)抗凍劑甘油外，我們也會(huì)添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來(lái)吸附在細(xì)胞表面形成保護(hù)薄膜，防止在冷凍過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的破壞。
另外在解凍細(xì)胞樣本的時(shí)候，在低溫條件下，不要讓整個(gè)細(xì)胞樣本解凍成液體，只要解凍到少量液態(tài)樣本出現(xiàn)就好。這樣也可以幫助更多的樣本存活過(guò)一次解-再凍的過(guò)程，方便下次或多次使用。
關(guān)于凍干保存，其實(shí)并不是所有的細(xì)菌都適合凍干，有的原代細(xì)胞沒(méi)法在凍干過(guò)程中存活。所以如果你實(shí)在需要超長(zhǎng)時(shí)間保存（超過(guò)十年）你的樣本，一定要自己驗(yàn)證一次，看凍干細(xì)胞再培養(yǎng)能不能成功。