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        1. 南京信帆生物技術(shù)有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第9年

          18001994881

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          Western Blotting檢測(cè),WB實(shí)驗(yàn)代測(cè),WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)
          • Western Blotting檢測(cè),WB實(shí)驗(yàn)代測(cè),WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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          貨物所在地:江蘇南京市

          更新時(shí)間:2024-09-14 21:00:06

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          信帆生物提供 Western Blotting檢測(cè)服務(wù),全程提供技術(shù)指導(dǎo),代測(cè)時(shí)間為兩周,歡迎!Western Blotting檢測(cè),WB實(shí)驗(yàn)代測(cè),WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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          Western Blotting檢測(cè),WB實(shí)驗(yàn)代測(cè),WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)

          免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢

          測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫

          生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分

          析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

          凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA 結(jié)合蛋

          白和其相關(guān)的DNA 結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA 結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA 結(jié)合蛋白和特定的RNA 序列的相互作用。

           

          項(xiàng)目

          市場(chǎng)價(jià)(元

          優(yōu)惠價(jià)(元)

          說明

          Western blot 檢測(cè)

           1500元/膜

          電訊元/膜

           每張膜1--8樣本(一抗需確認(rèn))

          EMSA 800 

           2800元/膜 

          電訊元/膜

           每張膜1--8樣本(探針及試劑需確認(rèn))

           

           Western Blotting 技術(shù)服務(wù)

           

           

          Western blot樣本要求

          客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品, 檢測(cè)目的蛋白的一抗(或由本公司代購(gòu))。樣品要求為:

           

          1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

          2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

          3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

           

          Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

          內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,可提供掃描圖,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù),將提供檢測(cè)報(bào)告


          服務(wù)內(nèi)容

          我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測(cè)的全流程服務(wù),如需要還可進(jìn)行灰度分析。

          說明

          1、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品(純蛋白或有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織)作為陽(yáng)性對(duì)照。

          2、每張膜檢測(cè)1-8個(gè)樣品。

          3、如果一抗由客戶提供,請(qǐng)?jiān)谡_條件下保存,避免污染及反復(fù)凍融。

           


           關(guān)于Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析


          『無信號(hào)』

          原因建議
          一抗與二抗不匹配選擇針對(duì)一抗來源種屬制備的二抗;
          一抗不識(shí)別目的的種屬的蛋白

          1)檢查抗體的說明書,適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬
          2)使用陽(yáng)性對(duì)照來檢查抗體質(zhì)量

          一抗或二抗不足,沒有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白

          1)降低抗體稀釋倍數(shù),增加抗體濃度
          2)延長(zhǎng)孵育時(shí)間

          封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)改變封閉劑
          抗原不足

          1)每個(gè)泳道加入20-30ug總蛋白
          2)制備樣品要使用蛋白酶抑制物及使用陽(yáng)性對(duì)照

          在檢測(cè)的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低檢測(cè)樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照,用于確定檢測(cè)樣本是否為陰性,也可更換細(xì)胞系
          蛋白轉(zhuǎn)膜效率低

          1)利用麗春紅檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反
          2)轉(zhuǎn)移前膜是否用甲醇侵泡過

          膜過渡洗滌減少洗滌時(shí)間和強(qiáng)度
          疊氮鈉抑制二抗活性二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉

           

           

          『沒有特異條帶』

          原因建議
          細(xì)胞系傳代過多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備
          蛋白本身有很多修飾1)查閱文獻(xiàn),確定目的蛋白是否存在多種修飾
          蛋白被消化或者降解1)蛋白樣品確保未被污染,確保含有蛋白酶抑制劑
          所檢測(cè)蛋白存在多種剪接體,導(dǎo)致分子量大小不同1)查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
          一抗或二抗?jié)舛雀?/td>1)減低抗體濃度
          洗滌不夠1)充分洗滌

           

           

          『條帶大小不正確』

          原因建議
          目的蛋白被降解確保蛋白樣品未被污染,確保含有蛋白酶抑制劑
          存在不同的剪接體查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
          重組蛋白檢測(cè)是否存在額外加入的蛋白
          特殊蛋白如MDM2等仔細(xì)閱讀抗體說明書

           

          尊敬的客戶:

          本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等,如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息,您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息,至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求,歡迎新老客戶放心選購(gòu)自己心儀產(chǎn)品,我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)!

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