產(chǎn)品名稱: | 大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa試劑盒 |
英文名稱: | Rat PKC (Protein Kinase C)elisa Kit |
規(guī)格: | 48T/96T |
產(chǎn)品保質(zhì)期: | 6個(gè)月 |
保存條件: | 2-8度 |
該試劑盒操作原理: |
本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系 |
我們?cè)谧鯡LISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,通常選取血液樣本為我們的代測(cè)樣本,具體收集方法如下: |
血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。 |
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa試劑盒 |
我們?cè)谶x擇抗凝劑的時(shí)候,有幾點(diǎn)需要注意的: |
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要*,同時(shí)所取的全血的量也要盡量*; ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固; ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿); ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后 用于測(cè)定。 |
組織樣本也是我們經(jīng)常使用到的,動(dòng)物組織樣本的前處理,勻漿方法如下: |
動(dòng)物組織樣本的前處理: 1、取組織塊(0.1g~0.2g)在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入勻漿管中。 2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(使用0.86%的生理鹽水)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。 3、勻漿的方式有多種:手工勻漿,機(jī)器勻漿,超聲粉碎。 ①、手工勻漿:將玻璃勻漿管置于冰水浴條件下,手動(dòng)勻漿,30秒/次,間隔30秒,重復(fù)6~8次,制成10%的勻漿液。 ②、機(jī)器勻漿:用機(jī)械式勻漿機(jī)(組織搗碎機(jī)或內(nèi)切式勻漿機(jī)),8000~10000轉(zhuǎn)/分,冰水浴條件下,10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次。(皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間) ③、超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。 鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。 4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定.(測(cè)定相應(yīng)指標(biāo)的同時(shí)需測(cè)一下相應(yīng)樣本的蛋白濃度,總蛋白測(cè)試盒本所有售) |
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa試劑盒 |
我們銷售的試劑盒的具體操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn),具體步驟如下(試劑盒已經(jīng)包含了所有試劑,自備儀器為酶標(biāo)儀,洗板機(jī),溫育箱,移液器): |
1. 加樣:標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔,每個(gè)濃度設(shè)定平行孔,加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,空白孔設(shè)定1個(gè)孔加入50微升蒸餾水(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔,在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 |
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。 |
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 |
5. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 |
6. 溫育:操作同3。 |
7. 洗滌:操作同5。 |
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. |
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 |
10. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 |
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa試劑盒 |
我們銷售的試劑盒性能穩(wěn)定: |
試劑盒性能我們是通過幾個(gè)數(shù)值反應(yīng)的:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批間分別小于9%和11% |
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