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大鼠甘油三酯(TG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠甘油三酯(TG)水平。用純化的大鼠甘油
三酯(TG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甘油三酯(TG) ,
再與 HRP 標記的甘油三酯(TG)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘油三酯(TG)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定
吸光度(OD 值) ,通過標準曲線計算樣品中大鼠甘油三酯(TG)濃度。
大鼠甘油三酯(TG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒組成
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1 個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品:2.7 mmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30 倍)×1瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞
濃度達到 100萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4) ,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分) 。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含 NaN3的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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