免疫組化操作步驟

⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內源性過氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘 x2 （如需抗原修復，可在此步后進行）。

⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀釋）封閉，室溫孵育 10 分鐘，傾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 過一晚。

⑸、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量 生物素標記二抗工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘（DAB 或 NBT/BCIP）

⑾、自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。

免疫組化染色步驟

冰凍切片 4-8um ，室溫放置 30 分鐘后，入 4 ℃丙酮固定 10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過氧化氫孵育5-10分鐘，消除內源性過氧化物酶的活性。

免疫組化判定分析

 免疫組化染色（IHC）

從實驗結果而言，免疫組化技術服務主要涉及抗體實驗結果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點內容，只有嚴格的實驗設計，標準的實驗操作，專業(yè)化的結果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點對于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關于上述服務內容應該在實驗開始前由雙方明確，一般而言，客戶方實驗前應提出需要什么樣的結果與分析，例如是簡要還是詳細的描述實驗結果，需要實驗數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與，則事先申明。

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