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        1. 南京信帆生物技術有限公司
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          豚鼠 胃蛋白酶(PP) 酶聯(lián)免疫分析

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          豚鼠 胃蛋白酶(PP) 酶聯(lián)免疫 分析
          試劑 盒使用說明書
          本試劑盒僅供研究使用。
          檢測范圍: 96T
          10IU/L -320IU/L
          使用目的:
          本試劑盒用于測定豚鼠血清、血漿及相關液體樣本中胃蛋白酶(PP)活性。
          實驗原理
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豚鼠胃蛋白酶(PP)水平。用純化的豚鼠胃蛋白酶
          (PP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胃蛋白酶(PP),再與 HRP
          標記的胃蛋白酶(PP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物
          TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏
          色的深淺和樣品中的胃蛋白酶(PP)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),
          通過標準曲線計算樣品中豚鼠胃蛋白酶(PP)活性濃度。
          試劑盒組成
          1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
          2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(640IU/L) 0.5ml×1 瓶
          3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
          5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
          6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
          標本要求
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
          2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟
          1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
          釋。
          320IU/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
          160IU/L 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
          80IU/L 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
          40IU/L 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
          20IU/L 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
          待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
          然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
          量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
          4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
          重復 5 次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同 3。
          8. 洗滌:操作同 5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
          11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
          液后 15 分鐘以內進行。

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