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南京信帆生物技術(shù)有限公司資料大小
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517次測定意義:
糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)??扇苄?br />糖是指樣品中的還原單糖及在本法測定條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水
解為葡萄糖的淀粉。
測定原理:
蒽酮比色法。可用于可溶性單糖、寡糖和多糖的含量測定,具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用
于微量樣品的測定等優(yōu)點(diǎn)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸(不允許快遞)研缽、
和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:粉劑×1 瓶,4℃避光保存;
試劑二:10mL×1 瓶 ,4℃保存;
樣品中可溶性糖的提?。?br />稱取0.1~0.2g 樣本,加入1mL 蒸餾水研磨成勻漿,倒入有蓋離心管中,95℃水浴10min(蓋
緊,以防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液于10ml 試管中,用蒸
餾水定容至10mL,搖勻備用。
測定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95 度。
3、工作液的配制:在試劑一中加入5mL 試劑二,充分溶解,如較難溶解,可加熱攪拌;用
不完的試劑4℃保存一周;
混勻,置95 度水浴中10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫后,于620nm 處,分
別讀取空白管和測定管吸光值,ΔA=A 測定管-A 空白管。
注意:1、空白管只要做一管。
2、如果ΔA 大于1,需要將樣本用蒸餾水稀釋,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
3、由于濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性,請謹(jǐn)慎操作。
可溶性糖含量計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 8.55x - 0.07;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
2、按樣本鮮重計(jì)算:
可溶性糖(mg /g 鮮重)= [(ΔA+0.07) ÷8.55×V1]÷(W×V1÷V2)=1.17×(ΔA+0.07) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
可溶性糖(mg /mg prot)=[ (ΔA+0.07) ÷8.55×V1]÷(V1×Cpr)=0.117×(ΔA+0.07) ÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,10mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本鮮重,g。
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