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南京信帆生物技術(shù)有限公司資料大小
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301次測(cè)定原理:
利用提取液提取,然后用顯色劑進(jìn)行顯色,顯色后在570nm 下進(jìn)行測(cè)定。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、
蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體120mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入5mL 蒸餾水充分溶解混勻,用不完的試劑仍 4℃
保存。
谷氨酸提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞
數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL
試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30
次);8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組
織,加入1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積(mL):試劑一體積
(mL)為1:5~10 的比例(建議取0.1mL 血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入1mL 試劑一),進(jìn)
行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋EP 管中加入下列試劑:
試劑名稱(μL) 測(cè)定管 對(duì)照管
樣本 250
試劑一 250
試劑二 50 50
混勻,90℃水浴20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,取200uL 至微量石英比色皿
或96 孔板中,于570nm 波長(zhǎng)處記錄吸光值A(chǔ)?!鰽=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一
管。
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