【組織培養(yǎng)試劑】

一般提示：優(yōu)化您的細(xì)胞生長(zhǎng)條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經(jīng)可能減少所用試劑的變更。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基（如，RPMI 1640和DMEM）。培養(yǎng)基的成分包括營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（氨基酸，葡萄糖），維生素，無(wú)機(jī)鹽，和緩沖物質(zhì)。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時(shí)新鮮加入就可能會(huì)產(chǎn)生問題。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存。因?yàn)橐阎幸恍┙M分和緩沖物質(zhì)，如HEPES，當(dāng)暴露于光照下就會(huì)分解產(chǎn)生細(xì)胞毒性物質(zhì)。

酚紅試劑可保護(hù)細(xì)胞免受一些HEPES降解所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)，但在使用未加酚紅試劑的培養(yǎng)基的應(yīng)用場(chǎng)合下，如熒光素酶的測(cè)定，細(xì)胞毒性則仍然是一個(gè)問題。

胎牛血清—血清是一種含有白蛋白、球蛋白、生長(zhǎng)促進(jìn)因子和生長(zhǎng)抑制因子的極為復(fù)雜的混和物。采集血清所用動(dòng)物的年齡、營(yíng)養(yǎng)水平、和健康狀況可影響到血清中這些成分的數(shù)量和質(zhì)量。因此血清易受顯著生物學(xué)變異的影響。

添加劑—某些細(xì)胞的生長(zhǎng)依賴于一些對(duì)生命力或細(xì)胞分裂*的物質(zhì)（如，生長(zhǎng)因子，微量元素，必需代謝物和蛋白等）。

CO₂培養(yǎng)箱—細(xì)胞生長(zhǎng)所需環(huán)境為37℃、相對(duì)濕度為95％的CO₂培養(yǎng)箱。用CO₂是為了控制pH值。細(xì)胞生理對(duì)pH的變化非常敏感，因此多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基都含有碳酸氫鹽緩沖體系。有些培養(yǎng)基需要CO₂ 濃度為5％來(lái)有效控制pH值，而另一些則需要10％的CO₂。需要向您的培養(yǎng)基供應(yīng)者核對(duì)一下適當(dāng)?shù)腃O₂濃度。如果培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)條件與所需條件不一致（溫度、濕度和CO₂）則會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的板間變異性。來(lái)自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物、化學(xué)物質(zhì)，或真菌／細(xì)胞的污染也都可能影響到細(xì)胞生理

【細(xì)胞】

一般提示：密切觀察您的細(xì)胞；確保它們狀態(tài)良好。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前，先制定一個(gè)適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持*狀態(tài)。

增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個(gè)關(guān)鍵元素，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的zui重要的變量。為幫助解決這些問題，羅氏應(yīng)用科學(xué)部與ATCC®（美國(guó)菌種保藏中心）進(jìn)行了合作。
為保證將被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的質(zhì)量，羅氏應(yīng)用科學(xué)部建議使用新近從ATCC®獲得的細(xì)胞系。

分裂細(xì)胞相比較非分裂細(xì)胞—分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA。因此對(duì)大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前一天種板。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)不應(yīng)處于生長(zhǎng)過度的狀態(tài)。由于FuGENE® 6和HD轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于細(xì)胞作用溫和，可同時(shí)進(jìn)行貼壁細(xì)胞的種板和轉(zhuǎn)染。
此外，還常用促有絲分裂刺激物（如，病毒轉(zhuǎn)化，生長(zhǎng)因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細(xì)胞）來(lái)活化原代培養(yǎng)細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異顯著。天生趨于懸浮的細(xì)胞（如HL 60，Jurkat）非常難以轉(zhuǎn)染。相反，天生為貼壁的細(xì)胞（如HEK，CHO）則可適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)的條件。

這兩種細(xì)胞（即那些天然懸浮的和那些適應(yīng)懸浮的細(xì)胞）的漿膜是不一樣的。據(jù)推測(cè)轉(zhuǎn)染過程中的一個(gè)限制步驟就是通過內(nèi)吞作用攝取轉(zhuǎn)染分子（DNA或RNA與轉(zhuǎn)染試劑的復(fù)合物）；然而，目前對(duì)此尚未有分子水平上的合理機(jī)制的解釋。細(xì)胞間膜結(jié)構(gòu)的差異可能是某些細(xì)胞類型天生難以轉(zhuǎn)染的部分原因。所以，尋找更有效轉(zhuǎn)染試劑的工作目前還主要是經(jīng)驗(yàn)性的，尤其對(duì)于那些天生為懸浮的細(xì)胞而言更是如此。

這常常是在不含血清而含有抑制轉(zhuǎn)染的特殊添加劑的培養(yǎng)基中發(fā)生。經(jīng)小心處理后，這些細(xì)胞可適應(yīng)于在沒有添加劑的環(huán)境中懸浮生長(zhǎng)。如果這些適應(yīng)于懸浮生長(zhǎng)的貼壁細(xì)胞在沒有這些添加劑的環(huán)境中生長(zhǎng)，那么它們就可以被轉(zhuǎn)染。

分批方案—在對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分批傳代培養(yǎng)之前，必須把貼壁細(xì)胞用胰蛋白酶消化使之脫離培養(yǎng)基質(zhì)。這個(gè)常規(guī)操作可導(dǎo)致正常細(xì)胞功能受到嚴(yán)重?fù)p害。因此分批方案的不同（如，胰蛋白酶消化時(shí)間的延長(zhǎng)，胰蛋白酶的失活，以及消化后直到轉(zhuǎn)染開始的時(shí)間）都可能對(duì)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有所影響。
如果在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞過于密集，那么種到培養(yǎng)板上的就會(huì)是細(xì)胞團(tuán)塊而非單個(gè)細(xì)胞。
對(duì)于某些細(xì)胞／試劑組合而言，漿膜狀態(tài)被改變后有可能會(huì)影響到所用試劑和DNA的*配用量和配比。

傳代次數(shù)—傳代次數(shù)是指對(duì)一個(gè)細(xì)胞系進(jìn)行分批傳代的頻度（通常在一個(gè)實(shí)驗(yàn)室范圍內(nèi)）。在某些情況下，自建立細(xì)胞系起的確切傳代次數(shù)無(wú)法得知。

某些細(xì)胞系相比較其他細(xì)胞系而言較不穩(wěn)定，可能會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而改變，視不同的細(xì)胞系和培養(yǎng)條件而定。培養(yǎng)條件的不同可引起克隆選擇。因此名稱相同的同一細(xì)胞系有關(guān)其生理學(xué)和形態(tài)學(xué)（以及轉(zhuǎn)染能力）性質(zhì)可能會(huì)有很大的差異。