目錄:北京索萊寶科技有限公司>>酶>>酶>> E010100 TS-UNG 溫度敏感型UNG酶
產(chǎn)品介紹:
TS-UNG酶基因來源于低溫微生物，經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)獲得的新型溫度敏感型UNG酶。該酶與常規(guī)UNG酶相同，能夠催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶，對RNA無活性，主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。TS-UNG酶與常規(guī)UNG酶相比，對溫度敏感、易于滅活，從而避免了常規(guī)UNG酶滅活后殘留活性對熒光PCR靈敏度及擴(kuò)增產(chǎn)物的降解作用。
TS-UNG酶可以在25℃~50℃范圍內(nèi)使用，在37℃左右具有大反應(yīng)活性。建議在37℃，10min消化含dUTP模板，在50℃，10min或95℃，2min進(jìn)行滅活。利用TS-UNG酶低溫消化、低溫滅活的特性，TS-UNG酶可以用于RT-PCR防止擴(kuò)增污染。
活性定義：
37℃條件下，1小時(shí)降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。
規(guī)格：1U/μl
儲存緩沖液：
20 mM Tris-HCl，pH 7.5（25℃），100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，0.1% Triton X-100，50% glycerol.
保存條件：
保存于-20℃。并避免保存時(shí)反復(fù)凍融。
反應(yīng)條件：
1、反應(yīng)體系:
Component | Volume per Reaction（μl） | Concentration in Master Mix |
Template | * | < 1μg/reaction |
Primer 1 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
Primer 2 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
d NTPs (replace dTTP for 200μM~600μM dUTP） | 1 | 200μM（dATP、dGTP、dCTP） |
10×PCR Buffer | 5 | 1× |
25mM MgCl2 | 2~8 | 1.0~4.0mM |
Taq（5U/μl） | 0.25 | 1.25U |
TS-UNG（1U/μl） | 0.2~0.5 | 0.2~0.5U |
H2O | * | —— |
Total volume | 50μl |
2、Incubate the product for 10min at 37℃；
3、Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min，or 95℃ for 2min；
質(zhì)量控制：
1、SDS-PAGE電泳純度大于98%；
2、無核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性、RNase酶活性；
注意事項(xiàng)：
1、由于不同目的基因堿基組成不同，因此對TS-UNG酶的敏感度也不同，建議根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，在0.2~0.5U之間選擇TS-UNG適合用量。
2、避免多次凍融，切勿暴露在溫度波動較大之處。溫度波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。3、TS-UNG酶可以在PCR反應(yīng)前清除不慎污染的U-DNA分子。為有效防止污染，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須在所有的PCR反應(yīng)中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進(jìn)行擴(kuò)增，使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為U-DNA。
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