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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

GST標簽蛋白純化磁珠是一種專為高效、快速純化谷胱gan肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白而設(shè)計的一種新型超順磁性微球產(chǎn)品，具有快速磁響應(yīng)性、豐富羥基官能團和粒徑相對集中等特點。該磁珠可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，極大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業(yè)領(lǐng)域便捷地進行GST 融合蛋白的純化。

本品特異性好，性價比高，可以一步從細菌、酵母菌或哺乳動物天然細胞裂解物中純化谷胱gan肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱gan肽依賴性蛋白和谷胱gan肽重組衍生物。GST是重組蛋白制備過程中常用的一種標簽蛋白，以輔助目的蛋白表達、檢測、純化。

同時，在使用磁性分離法的Pull-down實驗中，充當“誘餌蛋白"的重組GST融合蛋白通過親和作用與磁珠結(jié)合，當目標蛋白與固相載體混合時，就可被誘餌蛋白吸附，在磁力下，目標蛋白就從表達體系中分離出來，使用該磁珠進行GST Pull-down實驗，由于磁性分離不需要多次離心和較長的孵育時間，與傳統(tǒng)的層析法相比，操作更簡單、快速和自動化。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃長期儲存，有效期2年。

注意事項

1.磁珠保存過程中避免冷凍、干燥和高速離心等操作。

2.磁珠使用前，請充分震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。

3.使用過的磁珠重復使用時，建議純化同一種蛋白，純化不同種蛋白時，建議使用新磁珠，以避免交叉污染。

4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5.本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

一、緩沖液配制

1.平衡液/洗雜液：PBS, pH 7.4 (140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7.4）

2.洗脫液：50 mM Tris-HCl, 10 mM-20 mM還原型谷胱gan肽，pH 8.0

二、樣本制備

【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)。

2.1細菌或酵母表達的蛋白

將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中，7,000 rpm (7,500 xg)，離心15 min收集菌體，然后按照菌體：平衡液=1: 10 （W/V）加入平衡液，加入終濃度為1 mM的PMSF。加入溶菌mei，使其工作濃度為0.2-0.4 mg/mL。如果表達的宿主細胞內(nèi)含pLysS或pLysE，可以不加溶菌mei。谷胱gan肽同時也可加入其他蛋白酶抑制劑，但不能影響目的蛋白與磁珠的結(jié)合。

1）將菌體沉淀懸浮起來，（如果菌液濃度高，也可考慮加入10 μg/mL RNase A和5 μg/mL DNase I）,混勻，冰上超聲破碎細胞，至菌液基本保持澄清。

2）將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中，10,000 rpm (15,000 xg)，4℃離心20-30 min。 取上清，置于冰上備用或-20℃保存。

2.2酵母、昆蟲和哺乳細胞分泌表達可溶性蛋白

1）將細胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯中，5,000 rpm (3,800 xg)，離心10 min，收集菌體得上清，即可直接使用。

2）對于大量體積的上清，需加入硫酸銨沉淀濃縮后，然后用Lysis Buffer透析后才能上樣。

三、磁珠準備

1.可根據(jù)目標蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息來準備適量的磁珠（磁珠體積為總體積的20%）,將磁珠反復顛倒，充分混勻，使用移液器取適量的磁珠懸浮液，置于離心管中，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄清液。

2.將離心管從磁分離器上取下來，加入與懸浮液等體積的平衡液，使用槍頭反復吹打5次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄清液，重復洗滌2次。

四、GST標簽蛋白純化

1. 結(jié)合 將備好的樣本加入到處理好的磁珠中，反復顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（也可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整，延長孵育時間）。

2. 洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復吹打5次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。至少重復上述步驟2次。

3. 洗脫 在上述離心管中加入3-5倍磁珠體積的洗脫液，用移液器吹打5次，然后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，5-10 min后，置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸取上清液，收集洗脫組分，即為目標蛋白。重復操作兩次，分別收集洗脫組分，留待檢測。

4.磁珠保存 使用后的磁珠用1 mL洗脫液重懸磁珠，然后置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。該操作重復兩次。 再加入1 mL平衡液，懸浮磁珠，然后置于磁分離器上，大約1 min,待溶液變澄清后，吸棄上清液。再加入4倍磁珠體積的20%乙醇，置于4℃保存。

五、Pull-Down 實驗

1.磁珠結(jié)合誘餌蛋白 將含有GST標簽誘餌蛋白的樣品加入到備好的磁珠中，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（時間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整）。

洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。重復上述步驟2次。 即得到GST誘餌蛋白-磁珠復合物。

3.目標蛋白與誘餌蛋白-磁珠復合物結(jié)合 將含有目標蛋白的樣品加入到處理好的誘餌蛋白-磁珠復合物中，顛倒混勻。將離心管置于混合儀上，室溫孵育30 min以上（時間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整）。

4.洗雜 將離心管置于磁分離器，大約1 min，待溶液變澄清后，用移液器移出上清液，保留，以備取樣檢測。向離心管中加入5倍懸浮液體積的洗雜液，使用槍頭反復吹打5-10次，將離心管置于磁分離器上，大約1 min,待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清液。重復上述步驟2次。 目標蛋白通過與誘餌蛋白的結(jié)合，從混合體系中被捕獲。

5.目的蛋白的洗脫  在上述離心管中加入3-5倍磁珠體積的洗脫液，用移液器吹打5次，然后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)離心管，5-10 min后， 置于磁分離器上，大約1 min，待溶液變澄清后，吸取上清液，收集洗脫組分，即得到靶蛋白和目標蛋白復合物。再重復操作兩次，分別收集洗脫組分，留待檢測。