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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase
| 參考價(jià): | ￥ 103 |
| 訂貨量: | 1 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：1251更新時(shí)間：2023-02-22 16:37:21
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 U |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10148ES10 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 基因克?。粡?fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫(kù) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase | 10148ES10 | 10 U | 103.00 |
10148ES60 | 100 U | 683.00 | |
10148ES76 | 500 U | 2383.00 | |
10148ES80 | 1000 U | 4583.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶 DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了熱啟動(dòng)因子，極大提高了擴(kuò)增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力，擴(kuò)增速度達(dá)到15 sec/kb，擴(kuò)增目的片段的長(zhǎng)度可長(zhǎng)達(dá)10 kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化緩沖液，添加了PCR增強(qiáng)組分，使得該酶適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編碼/規(guī)格 | |||
10148ES10 （10U） | 10148ES60 （100U） | 10148ES76 （500U） | 10148ES80 （1000U） | ||
10148-A | Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 250 μL×2 |
10148-B | 2×Canace® Gold PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） | 300 μL | 1 mL×3 | 1 mL×15 | 1 mL×30 |
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫(kù)。
活性定義
用活性化的大馬哈魚(yú)精DNA為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無(wú)變化。
切口酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無(wú)變化。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Canace® Gold PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL?？梢栽?.5-2 U/50 μL之間進(jìn)行優(yōu)化，請(qǐng)勿超過(guò)2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應(yīng)體系中。
4）Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。
6）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
模板種類 | 擴(kuò)增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50ng-200 ng |
質(zhì)粒或病毒DNA | 10pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過(guò)PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
梯度溫度退火程序（難擴(kuò)增基因推薦程序）:
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 1 |
預(yù)變性 | 預(yù)變性 | 預(yù)變性 | 15，每個(gè)循環(huán)降低1℃ |
變性 | 變性 | 變性 | |
退火 | 退火 | 退火 | |
延伸 | 延伸 | 延伸 | 20 |
終延伸 | 終延伸 | 終延伸 | |
循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | 循環(huán)步驟 | |
預(yù)變性 | 預(yù)變性 | 預(yù)變性 | 1 |
【注】：
1）預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦溫度：98℃，時(shí)間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時(shí)間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長(zhǎng)可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時(shí)間：推薦溫度：72℃。時(shí)間：30 sec/kb，復(fù)雜模板根據(jù)實(shí)際情況可延長(zhǎng)至60 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請(qǐng)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴(kuò)增程序下的特點(diǎn)：
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產(chǎn)量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預(yù)混液 | 10149ES03/08 | 1/5 mL |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT | 10909ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點(diǎn)） | 10910ES20 | 20 T |
一步法快速克隆試劑盒HOT | 10911ES20 | 20 T |
多片段一步法快速克隆試劑盒HOT | 10912ES10 | 10 T |
定點(diǎn)突變?cè)噭┖蠬OT | 11003ES10 | 10 T |
多點(diǎn)突變?cè)噭┖蠬OT | 11004ES10 | 10 T |
HB210923
