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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40207ES |
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè),制藥 |
臺盼藍染色液 Typan Blue Solution
臺盼藍(Trypan Blue),一種偶氮、親水性酸性藍色染料,可透過死亡細胞和垂死細胞的細胞膜,將其染成藍色,而活細胞由于其細胞膜的完整性,可將臺盼藍排斥在外,因此,通過顏色的變化即可將活細胞(活細胞呈透明無色)和死細胞鑒別開來,基于此原理,本品廣泛用于細胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍與蛋白結合形成的復合物可發(fā)出紅色熒光。另外,臺盼藍(合適濃度)還常用來淬滅細胞表面的自熒光或者其他熒光信號。
本品為溶于生理鹽溶液的0.4%(w/v)臺盼藍染色液,以無菌形式提供,細胞培養(yǎng)級別。
運輸和保存方法
室溫運輸和保存即可,二年有效。
注意事項
1)細胞計數(shù)前,需要用生理鹽緩沖液或者無血清培養(yǎng)基對細胞進行充分的清洗,因為細胞對血清蛋白具有非常高的親和力,殘留的血清蛋白會導致較暗的染色背景。
2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1)對于懸浮細胞,離心收集細胞,充分清洗后,用適當緩沖液如PBS,HBSS重懸制成單細胞懸液;對于貼壁細胞,先用胰|酶消化細胞,再按照懸浮細胞的方法制備單細胞懸液。
2)取0.5ml單細胞懸液,按照1:1比例與0.5ml 0.4%臺盼藍染色液充分混勻,室溫染色3~10min。
【注1】:因臺盼藍具有細胞毒性,染色時間過久會導致部分死細胞染色,干擾計數(shù)。
【注2】:若細胞密度比較高,可取0.2ml單細胞懸液,經(jīng)適當緩沖液稀釋到0.5ml,之后再用0.5ml 0.4%臺盼藍染色液染色。
3)取少量上述染色細胞加入血細胞|計數(shù)板,于顯微鏡低倍鏡下計數(shù),分別計算著色細胞(即損傷細胞和死細胞)和總細胞。
【注1】:用移液槍加染色細胞時,沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。
【注2】:1mm2方格內細胞數(shù)通常控制在20-50 cells,當細胞數(shù)超過200個,需重新調整稀釋倍數(shù)。
4)按照以下公式來計算細胞數(shù)目和活細胞百分比,
a,計算每ml細胞數(shù)目:Cells/ml=1mm2大方格內的平均細胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104;【注】:此時的稀釋倍數(shù)為:步驟2所取的單細胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數(shù)
b,總細胞數(shù)目:Total cells=(Cells/ml)×zui初制備單細胞懸液的總體積
c,細胞活力值:Viability(%)=(總細胞數(shù)-總著色細胞數(shù))/總細胞數(shù) ×100
【注】:通常情況,健康的對數(shù)期培養(yǎng)細胞,活細胞至少占到95%。
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