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11202ES08實(shí)時(shí)熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix)
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11202ES08 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：2722更新時(shí)間：2024-09-04 16:51:56
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5 x 1mL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11202ES08 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價(jià)格（元） |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) 實(shí)時(shí)熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix) | 11202ES03 | 1 mL | -20℃避光 | 180.00 |
11202ES08 | 5×1 mL | -20℃避光 | 498.00 | |
11202ES50 | 50×1 mL | -20℃避光 | 7200.00 | |
11202ES60 | 100×1 mL | -20℃避光 | 12877.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix實(shí)時(shí)熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix)(Low Rox Plus)是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)混合溶液。Mix中含有熱啟動(dòng)Hieff® DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+及Low Rox。使用時(shí)，僅需在擴(kuò)增體系中加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
本品采用的DNA聚合酶配體可以隨溫度變化實(shí)時(shí)調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
適用機(jī)型
Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio Dx, QuantStudio3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000.
運(yùn)輸與保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲存，有效期18個(gè)月。
本品避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存或配制反應(yīng)體系時(shí)需避免強(qiáng)光照射。
注意事項(xiàng)
1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號：11123ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀物質(zhì)，4℃放置并上下顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
4.本產(chǎn)品僅作科研用途！
反應(yīng)體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積（μl） | 體積（μl） | 終濃度 |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
Reverse Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
模板DNA | X | X | - |
無菌超純水 | to 50 | to 20 | - |
【注】： 使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM之間進(jìn)行調(diào)整。
b) 模板濃度：如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5-10倍稀釋，最佳模板加入量以擴(kuò)增得到的CT值在20-30個(gè)循環(huán)為好。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用20μl或50μl，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
擴(kuò)增程序（兩步法） 擴(kuò)增程序（三步法）
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | 循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | |
預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 | 預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 | |
變性 | 95℃ | 10sec | 40 | 變性 | 95℃ | 10sec | 40 | |
退火/延伸 | 60℃ | 30sec★ | 退火 | 55-60℃ | 20sec | |||
延伸 | 72℃ | 20sec★ | ||||||
熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | 熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | |||
【注】高特異性可選擇兩步法，高效率擴(kuò)增可選擇三步法。
a) 預(yù)變性時(shí)間：根據(jù)不同模板和引物的具體情況可適當(dāng)縮短至2min。
b) 退火溫度和時(shí)間：請根據(jù)引物和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。
c) 熒光信號采集（★）：請按照儀器使用說明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置，幾種常見儀器的時(shí)間設(shè)定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
結(jié)果分析
定量實(shí)驗(yàn)至少需要三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴(kuò)增曲線及熔解曲線。
1) 擴(kuò)增曲線：標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線為S型。
Ct值落在20-30之間時(shí)，定量分析最準(zhǔn)確；
Ct值小于10，需要將稀釋模板后，重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
Ct值介于30-35之間時(shí)，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴(kuò)增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；
Ct值大于35時(shí)，檢測結(jié)果無法定量分析基因的表達(dá)量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應(yīng)特異性好可以進(jìn)行定量結(jié)果分析；若熔解曲線出現(xiàn)雙峰或者多峰，則不能進(jìn)行定量分析。
熔解曲線出現(xiàn)雙峰，需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標(biāo)峰是引物二聚體還是非特異性擴(kuò)增。
如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設(shè)計(jì)擴(kuò)增效率高的引物。
如果是非特異性擴(kuò)增，請?zhí)岣咄嘶饻囟?，或者重新設(shè)計(jì)更高特異性的引物。
引物設(shè)計(jì)指南
1. 推薦引物長度25bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長度150bp為佳，可以在100bp-300bp內(nèi)選擇。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3. 引物堿基分布要均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
4. 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對。避免引物3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
6. 設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit HOT | 11119ES60 | 100T |
Hifair®II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11121ES60 | 100T |
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT | 11123ES60 | 100T |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox )HOT | 11201ES08 | 5ml |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) HOT | 11202ES08 | 5ml |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus) HOT | 11203ES08 | 5ml |
HB210910
